实验七1、精液品质检查(精子形态和

《实验七1、精液品质检查(精子形态和》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验七1、精液品质检查（精子形态和实验六、精液品质检查（精子形态和畸形率的测定）?一、目的和要求?由于所需时间等原因，无需对每次采精进行精子畸形率的测定。但应当每月对每一头种公畜进行一次畸形率的测定，以绘出精子畸形率变化图。?畸形率突然增高，表明存在问题，应当查找和分析原因。畸形率在25%以内，受精力一般不受影响。畸形精子一般不表现前进运动，因而随着畸形精子数增多，精了活率下降。如在检查精子运动力时，可观察到许多畸形精子，也需要进一步作形态学检查。?通过本实验，了解家畜精液中精子形态与精液品质的关系，

2、掌握精子形态的分类和分析方法。二、材料和仪器设备?精液、染色液、高倍显微镜、相差显微镜等。三、方法和步骤?（-）威廉氏染色法：观察精子头部形态的染色方法。?1.染色液?复红（又称甜红）染色液：?复红原液（:LOg复红溶于100ml96%的酒精）10ml加5%的石碳酸（苯酚）100mlo?取上述混合液50ml加饱和伊红酒精溶液25ml放置两周后即可使用。?美兰（又称甲基兰）染色液：?美兰溶液（10g美兰溶于1000ml96%的酒精屮）30ml加0.01%KOH100ml过滤后再加入3倍量的蒸惚水，混合后

3、即可使用。?2.染色程序?（1）先制作精液抹片，要求薄而均匀。然后风干或用酒精灯火焰固定。？（2）浸入无水酒精屮固定2〜3min,取出风干。?（3）浸入0.5%氯胺T中l~2mino?（4）用清水洗1〜2min。?（5）迅速通过96%的酒精、风干。?（6）放入石碳酸复红染色液中10~15mino清水中沾2次。?（7）迅速通过美兰染色液。?（8）水洗后风干?（二）苏木精一伊红染色：?用以观察精液中非精子有形成分的类型和比例。细胞核染成蓝色，细胞浆呈红色。？苏木精溶液：?2g苏木精溶于100ml无水酒精屮

4、，加入100ml蒸憾水，100ml甘油，3g冰醋酸和10g铝酸钾混合，放置14天后使用，用前震荡。?伊红染液：?lg伊红加入100ml95%的酒精，染色时，取一定量的该液加入等量70%的酒精。?2.染色程序?（1）制备间断式的精液抹片（即当推制抹片时，不要一推到底，而要断续前推，使抹片厚度有一个梯度变化，染色后易于观察不同类型的精子成分）,风干。？（2）浸入无水酒精中固定3~5min,风干。?（3）分别浸入95%、75%的酒精和蒸徭水屮各Imino■■■■■■■?（4）浸入苏木精染色液中5mino（5

5、）浸入伊红染色液中1〜2min。（6）水洗1〜（7）通过70%和无水酒精。（8）风干后，用二甲苯加盖片封存。如不保存，直接观察。（三）精子尾部形态的观察1.福尔马林一缓冲液的制备将21.82g二水磷酸氢二钠和22.25g磷酸二氢钾分别溶于500ml蒸憎水中，取200ml磷酸氢二钠溶液加80ml磷酸二氢钾溶液，配成缓冲液。取该缓冲液100ml,加入40%（V/V）福尔马林溶液62.5ml,最后加蒸憾水至500ml□?2.观察程序?（1）将福尔马林一缓冲液注入容量为lml的小玻璃管中，然后置37°C恒温箱

6、中备用。?（2）根据原精液的浓度，向装有福尔马林一缓冲液的小管中注入2~5滴精液充分混合。?（3）取一滴混合后的精液置于载波片上，加盖片后静止数分钟。可在400倍的相差显微镜下观察精子尾部的形态。随机观察400个精子，计算各种尾部畸形精子所占的比例。?（四）精子形态的分类?1.头部畸形的精子?包括：窄头、头基部狭窄、梨形头、圆头、巨头、小头、头基部过宽、双头、顶部脱落等。但以前六种居多。?2.尾部畸形精子?包括：带原生质滴的精子（近端、远端）、无头的尾（它和无尾的头往往是一个精子的两部分，在分析时一般

7、算作尾部的畸形）、单卷尾、多重卷尾、环形卷尾、双尾等。?3.屮段畸形?包括：颈部肿胀、中段纤丝裸露、中段呈螺旋状、双中段等。?（五）非精子有形成分?多为精子形成过程屮的某些退化物，生殖上皮的脱落物和血细胞等。这些成分在精液中出现的比例和类型在一定程度上能反映睾丸和精液排出管道的生理状态。？在精液中经常出现的有：白细胞、红细胞和鳞状上皮细胞等。四、作业?绘出你所观察到的各类畸形精子。