莫诺苷神经保护作用机制研究

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1、莫诺昔神经保护作用机制研究王文*、李林、艾厚喜、安易、黄文婷、孙芳林(首都医科大学宣武医院药物研究室，北京，100053)摘要：目的系统阐述本室从山茱萸提取分离得到的化合物莫诺昔，体外神经保护作用和机制。方法大孔树脂分离、硅胶柱层析得到莫诺营，用H2O2损伤神经SY5Y细胞培养模型研究莫诺甘神经保护作用和机制。结果与结论莫诺甘可能通过抑制细胞去极化，降低细胞钙超载，降低活性氧生产，增加细胞小分子抗氧化物质和抗氧化酶活性减小自由基损伤，从而达到抑制细胞凋亡，增加神经营养作用这个途径产生神经保护作用。关键词：莫诺甘；神经保护；过氧化氢损伤缺血性脑损伤有高发病率、高死亡率、

2、高致残率的特点，严重地威胁着中老年人的身体健康和生活质量，随着经济的发展和社会压力的增加，发病年龄逐步降低，给社会和家庭带来了沉重的负担。脑缺血引发脑组织细胞产生级联反应，引起脑神经细胞凋亡和死亡，难以建立有效的信息联系，造成患者死亡或者愈后残疾，因此抑制脑神经细胞凋仁促进神经细胞再生是解决问题的关键，也是当前国际研究的热点⑴。人神经母细胞SH-SY5Y细胞系繁殖快，细胞形态、生理和生化功能与止常神经细胞和似，被广泛应用于神经系统疾病发病机制和纱物作用机制方面的研究。过氧化氢(H2O2)是一种较强的氧化剂，它产生的轻自由基(-OH)可引发脂质过氧化反应，对SY5Y细胞

3、有明显的损伤作用，模拟脑缺血造成的氧化损伤。我们对33味中药进行了神经保护作用筛选，发现山茱萸坏烯储菇营对D■半乳糖致脑老化痴呆小鼠模型及光化学诱导的脑梗塞人鼠模型均具有改善作用，并能提高隔海马穹隆伞切断拟Alzheimer病(AD)模型大鼠的学习记忆功能，明显减少模型鼠内侧隔核区和海马齿状回多形层神经元的丧失3】。对山茱萸环烯瞇话昔进一步分离，得到莫诺昔，有抗氧化、抑制神经细胞损伤的作用【“，本实验继续对莫诺昔对H2O2诱导的SH-SY5Y氧化损伤的神经保护作用机理进行研究。1化学研究山茱萸水提取，过大孔树脂，硅胶柱层析，甲醇重结晶，得到纯化合物，经ilMS.,3C

4、-NMR.!H-NMR波普数据确定莫诺营的结构，HPLC确定莫诺营的含量大于90%o2莫诺昔神经保护作用及机制实验2.1对正常神经SY5Y细胞的作用莫诺甘对SY5Y细胞的浓度超过10000

5、imol/L时产生细胞毒，在l-100

6、imol/L浓度范围内均可增加SY5Y细胞的MTT代谢率，10pmol/L是增加细胞活性的最适浓度，可以增加SY5Y细胞的MTT代谢率、细胞轴突长度、胞体面积和细胞计数。2.2对H2O2损伤神经SY5Y细胞的作用与损伤组相比，莫诺背3个剂量组显著减少了乳酸脱氢酶的释放率，降低细胞膜破损程度。2.3对H2O2损伤神经SY5Y细胞抗氧化作用莫诺甘

7、3个剂量组与损伤组相比，用流式细胞仪测定结果显示减少活性氧的释放，用试剂盒测定显著抑制了氧化损伤后一氧化氮(NO)及氧自由基(ROS)产生，提高谷胱廿肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。2.4对H2O2损伤神经SY5Y细胞抗凋亡作用3个剂量加药组与损伤组相比，WesternBlot试验显示促进受损神经细胞凋亡调控因子Bcl・2的持续高表达，抑制Caspase・3与Caspase-9的表达，用流式细胞仪测定显示抑制细胞凋亡。2.5对H2O2损伤神经SY5Y细胞神经营养作用3个剂量的莫诺昔组与损伤组比较，WesternBlot试验显示提高神经生长因子(NGF)及脑

8、源性神经营养I大I子(BDNF)的表达水平。2.6对H2O2损伤神经SY5Y细胞膜电位和钙离子的影响莫诺背3个剂量组与损伤组相比，显示升高给药组细胞膜电位，降低细胞内钙离子浓度。3结论莫诺昔可能通过抑制细胞去极化，降低细胞钙超载，降低活性氧生产，增加细胞小分子抗氧化物质和抗氧化酶活性减小ft由基损伤，从而达到抑制细胞凋亡，増加神经营养作用这个途径产生神经保护作用。本项研究已中请国家发明专利。REFERENCE[1]王文，黄文婷,艾厚喜，等.小药诱导脑成体神经干细胞的增殖分化.屮国康复理论与实践,2007,13(1):26-28.[2]陆华宝，李林，安文林,等冲药SSY

9、-B2对隔海马穹窿伞切断致大鼠学习记忆障碍的改善作用.屮国康复理论与实践,2003,9(5):286-288.[3]陆华宝，李林，安文林，等.中药SSY-B2促进中枢神经系统损伤后轴突再生的分子机制•中国康复理论与实践,2003,9(7):410-412.[4]WenWang,WentingHuang,LinLi,etal.MorronisidePreventsPeroxide-inducedApoptosisbyInductionofEndogenousGlutathioneinHumanNeuroblastomaCell.CellMolNeuro