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《血管内皮生长因子及自发性高血压大鼠血管重构关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、血管内皮生长因子及自发性高血压大鼠血管重构关系［摘要］目的探讨血管内皮生长因子与血管重构的关系。方法12只13周龄雄性自发性高血压大鼠（SHR组）作为观察组，12只同周龄雄性WKY大鼠作为正常血压对照组（WKY组）。分别于实验的第4、8周末每组处死大鼠各6只。采用酶联免疫吸附法测定血浆血管内皮生长因子浓度；放射免疫法测定颈动脉血管紧张素II浓度；病理图象管理系统测定颈动脉管腔横截面积、内弹力层围绕面积、外弹力层围绕面积，评价内膜和中膜增生程度；免疫组织化学法检测颈动脉血管内皮生长因子蛋白表达。结果与WKY组比较，SHR组血
2、浆血管内皮生长因子浓度明显下降，颈动脉血管内皮生长因子蛋白表达明显减弱，颈动脉血管紧张素II浓度却显著升高（P<0.01）,8周末这一作用更加显著（P<0.01）；SHR组内膜增生较WKY组明显，中膜面积显著增大（P<0.01）o结论在血管重构过程中，血管内皮生长因子水平下降，提示血管内皮生长因子可能具有改善血管重构的作用。［关键词］血管内皮生长因子；高血压；血管重构；大鼠中图分类号：R544.1文献标识码：A文章编号：1009_816X（2008）01_0021_03近年来，在对血管重构发病机制的研究中，生长因子和细胞因
3、子的作用倍受重视。目前认为，血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）在缺血、炎症及肿瘤的发生发展过程中具有生理和病理作用，而有关VEGF与血管重构（vascularremodeling,VR）的关系尚未见报道。本研究以SHR为研究对象，运用免疫组织化学技术和图象分析技术，探讨VEGF与VR的关系。1材料与方法1.1动物与分组：12只雄性自发性高血压大鼠，13周龄、雄性，体重272±20g,作为观察组（SHR组），同周龄雄性正常血压大鼠12只作为正常血压对照组（WKY组）。
4、分别于实验的第4、8周末每组处死大鼠各6只。1.2主要试剂与仪器：血管内皮生长因子ELISA法试剂盒、生物素化山羊抗兔IgG,链霉亲和素—生物素（SABC）和DAB显色剂（武汉博士德生物工程有限公司），Angll放射免疫试剂盒（北京北方生物技术研究所）。其余试剂为分析纯。1.3颈动脉标本制备：分离一侧颈动脉，用丝线结扎其近远心端，并将其离断，处理如下：（1）剪取约5mm,冰生理盐水中漂洗净残血，滤纸吸干后，准确称取主动脉0.05g按重量体积比1：99加0.86%冰生理盐水，制成1%的颈动脉组织匀浆。制备匀浆全过程在4*条件
5、下进行，并在15min内完成。将匀浆放入41冰箱静置1小时后以3000r/min.4°C离心lOmin,取上清液迅速冷冻保存，用于Angll浓度测定。(2)余动脉段用4%多聚甲醛固定24h后行梯度酒精脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度为0.5umo做VEGF免疫组织化学染色及弹力纤维和胶原纤维双染色。1.4血样采集：经腹主动脉取血2ml,采用ELISA法测定血浆VEGF浓度。以3000r/min离心10min(4°C条件下)，分离血浆，保存于-70"冰箱待测。1.5颈动脉血管紧张素II浓度测定：放射免疫法测定颈动脉Angl
6、l含量，操作步骤严格按试剂盒(灵敏度10ng/ml,批间变异系数＜15%,批内变异系数＜10%)说明进行。1.6颈动脉形态学指标：观察血管结构采用弹力纤维和胶原纤维双染色，使用病理图象管理系统测定颈动脉管腔横截面积（lumencrossarea,LA),内弹力层围绕面积(intraelasticlayerarea,IELA)，外弹力层围绕面积(extraelasticlayerarea,EELA),并计算内膜增生面积和中膜面积及其比值。1.7颈动脉血管内皮生长因子表达的检测：切片常规脱蜡至脱水，双蒸水冲洗，3%过氧化氢处理
7、后，加正常山羊血清封闭液，37°C20min,加适度稀释的单克隆抗大鼠VEGF蛋白抗体，re过夜，加生物素化山羊抗兔的二抗，37°C20min,加SABC,37°C20min,DAB显色。显微镜下控制显色程度，自来水冲洗终止反应。常规脱水、透明、中性树胶封片。血管细胞胞质内出现黄至棕黄色颗粒或匀质样结构为阳性。半定量分析运用显微计算机图象分析系统对颈动脉VEGF蛋白染色进行灰度值分析。1.8统计学处理：数据以均数加减标准差(x-±s)表示。SPSS11.0软件对各组数据进行单因素方差分析，多均数间两两比较用SNK_q检验。
8、显著性水平：P<0.05为有统计学意义。2结果2.1不同时间点血浆血管内皮生长因子及颈动脉血管紧张素II浓度的比较：与WKY组相比,SHR组血浆VEGF浓度显著降低(P<0.01),颈动脉Angll浓度显著上升(PV0.01)；与4周末相比，8周末SHR组血浆VEGF浓度显著降低(PV0.01),而颈动
