基因治疗基因诊断论文

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1、基因治疗基因诊断摘要基因诊断与基因治疗是现在能够在比较短的时间从理论色和变为现实的。主要利用分了牛物学的理论及技术方法，使人们可以在实验室构建各种载体，克隆及分析口的基因。所以对疾病能够深入到分子水平的研究并已取得了重大的进展。因此在20世纪70年代末诞生了棊因诊断;随后于1990年在美国实施了笫一基因治疗的临床试验方案。可见机芯诊断和基因治疗是现代分子生物的理论和技术与医学相结合。关键词慕因诊断基因治疗DNA等1.基因诊断的原理和方法1.1基因诊断的原理直接检查致病基因本身的界常。它通常使用基因本身或紧邻的DNA序列作为探针，或通过PCR扩增

2、产物，以探查基因无突变、缺失等异常及其性质，这称为直接基因诊断，它适用已知基因异常的疾病；当致病基因虽然已知但其界常尚属未知时，或致病基因本身尚属未知时，也可以通过对受检者及具家系进行连锁分析，以推断前者是否获得了带有致病基因的染色体。连锁分析是基于紧密连锁的基因或遗传标记通常一起传给了代，因而考察札I邻DNA是否传递给了子代，可以间接地判断致病慕因是否传递给了代。连锁分析多使用基因组中广泛存在的各种DNA多态性位，特別是基因突变部位或紧邻的多态性位点作为标记。RFLP、VNTR、SSCP、AMP-FLP等技术均可用于连锁分析。1.2基因诊断的

3、方法核酸分子杂交技术以检测样本中是否存在与探针序列互补的同源核酸序列。常用有以下方法。（1）限制性内切酶分析法。此方法是利用限制性内切酶和特界性DNA探针来检测是否存在基因变异。当待测DNA序列屮发生突变时会导致某些限制性内切酶位点的改变，其特异的限制性酶切片段的状态在电泳迁移率上也会随Z改变，借此可作出分析诊断。（2）DNA限制性片断长度多态性分析。在人类基因组中，平均约200对碱基可发生一对变斤（称为中性突变），中性突变导致个体间核甘酸序列的差界，称为DNA多态性。不少DNA多态性发生在限制性内切酶识别位点上，酶解该DNA片段就会产牛长度不

4、同的片断，称为限制性片段长度多态性（RFLP）。RFLR按孟徳尔方式遗传，在某一特定家族中，如果某一致病基因与特异的多态性片断紧密连锁，就口J用这一多态性片段为一种“遗传标志”，來判断家庭成员或胎儿是否为致病基因的携带者。甲型血友病、囊性纤维病变和苯内酮尿症等均可借助这一方法得到诊断。（3）等位基因特界寡核昔酸探针朵交法。遗传疾病的遗传基础是基因序列中发生一种或多种突变。根据己知基因突变位点的核井酸序列，人工合成两种寡核井酸探针：一是相应于突变基因碱基序列的寡核齐酸；二是相应于正常基因碱基序的寡核芹酸，用它们別与受检者DNA进行分了杂交。从而检

5、测受检者基因是否发生突变，以及是否冇新的突变类型2基因诊断的应川1、基因诊断在感染性疾病中的应用基因诊断具有髙度的敏感性和特界性，且简便、快捷，因此在病毒、细菌、支原体、衣原体、立克次体及寄生虫感染诊断中得到了广泛应用。（1）人乳头瘤病毒的检测：HPV（双链DNA病毒）难以用传统病毒培养和血清学技术检测，用核酸杂交、PCR等基因诊断方法则可迅速准确地检illHPV感染并同时进行分型。（2）肝炎病毒的检测：HBV（乙型肝炎病毒）的血清学检测方法已广泛地应用于临床，但其测定的只是病毒的抗原成分和机体対HBV抗原的反应，基因诊断则可直接检测病毒本身，

6、有英独特的优越性。首先，它高度頌感，可在血清学方法阳性Z前就获得诊断，这在献血员的筛选中尤为重要，基因诊断方法可将HBV、HCV（丙型肝炎病毒）、HIV（人类免疫缺陷病毒）的窗口期分别由血清学方法60、70、40天缩短到49、11和15天,在防止输血后肝炎的发生中有着重大的意义。其次，基因诊断可对患者血中的病原体定量检测，对临床评价抗病毒治疗效果，指导用药，明确病毒复制状态及传染性有重要价值。如我科引进的定量PCR仪，应用实时在线检测反应管屮的荧光信号变化进行病原体DNA的定量，结果更为准确对靠，产物检测始终在密闭状态下进行，有效地解决了产物污

7、染这一难题。基因诊断还可检出病毒变异或因机体免疫状态异常等原因不能测出相应抗原和抗体的病毒感染。（3）结核杆菌的检测：结核病是长期以来严重威胁人类，特別是发展中国家人民生命健康的常见病，传统的实验室诊断依赖痰涂片镜检和结核杆菌的培养与鉴定，但阳性率不高，所需时间长。冃前应丿IJPCR技术建立诊断方法，敏感度町达到少至100个细菌的水平，且应川针对在结核分枝杆菌屮拷贝存在的特界性重复序列引物，既使菌株发纶变界，也能准确检出。（4）基因诊断尚可用于HIV、人类巨细胞病毒（HCMV）、EB病毒、淋病奈瑟氏菌、幽门螺杆菌、脑膜炎奈瑟氏菌、螺旋体及疟原虫

8、、弓形虫等的检测，无不具冇灵敏、特异，能反应现行感染的优点2、棊因诊断在遗传病中的应用棊因诊断木身是在分了遗传学的棊础上发展起來的，在遗传病的诊断方而