临床医学毕业论文单纯疱疹病毒2型gg2“独特区”基因的原核表达及其血清学诊断价值

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1、XX大学毕业论文单纯疱疹病毒2＜船2“独特区：基因的原核表达及其血清学诊断价值姓名：2014年6月25日单纯疱疹病毒2型gG2“独特区”基因的原核表达及其血清学诊断价值作者：孙乐栋，曾抗，王茜，周再高，刘风岩【摘要】目的在大肠杆菌中表达HSV2的gG2“独特区”基因(gG2T)并对其免疫学特性进行初步研究。方法克隆HSV2的gG2T,并在大肠杆菌中表达gG2T融合蛋白。通过Westernblot和间接ELISA鉴定融合蛋口的活性。结果通过原核系统表达的gG2T融合蛋白可以与GST多克隆抗体结合并在46ku附近出现特异性结合条带。并且能够与确诊的HSV

2、2患者血清反应，而不与HSV1患者血清和正常人血清反应。结论获得了HSV2gG2T融合蛋白，它可以与GST多克隆抗体特异性结合并且可以同HSV2型患者血清特异性反应;获得的gG2T蛋口为研究以gG2蛋口作为靶区域的诊断试剂盒和疫苗研发打下实验基础。【关键词】单纯疱疹病毒；糖蛋白G2；独特区基因；融合蛋白；表达Expressioninprokaryoticsystemandscrodiagnosticvalueofherpessimplexvirustype2glycoproteinG2uniquedomainABSTRACT:ObjectiveToe

3、xpresstheuniquegeneofherpessimplexvirustype2(HSV2)gG2(gG2T)inE.coliBL21,andstudypreliminarilythelcmologiccharacteristicsofgG2Tprotein.MethodsWcclonedthegeneofgG2TandhadgG2TfusionproteinexpressedinE.coliBL21,andidentifieditsactivitybyWesternblotandindirectELISA.ResultsGlycoprote

4、inG2TfusionproteincouldcombinewithGSTpolyclonalantibodythroughgG2TfusionproteinexpressedinprokaryoticsystemandSDSPAGEhadaspecificbindingstrapin46kunearby.ThegG2TfusionproteincouldreactwithHSV2patientsscrum,butnotwithHSV1patientssemmandrGlobulin.ConclusionWeobtainedgG2Tfusionpro

5、tein,whichcancombinewithGSTpolyclonalantibodyandreactwithHSV2patientsserumspecifically.ItwillprovideanexperimentalbasisfordiagnostickitandvaccineofgG2proteintargetarea.KEYWORDS:herpessimplexvirus;gG2;uniquegene;fusionprotein;expression单纯疱疹病毒(herpessimplexvirus,HSV)属于a疱疹病毒亚科，是引起

6、人类病毒性疾病中常见的病毒之一。根据抗原性的差别可将其分为HSV1和HSV2两种血清型。HSV2型主要与外生殖器感染和新生儿感染冇关，可引起生殖器疱疹、新生儿疱殄。并认为可能与生殖器恶性肿瘤相关，同时增加了AIDS的感染机会［1］。HSV2病毒颗粒中冇至少12种胞膜糖蛋白，其中gG2为型特异性抗原［2］。gG2在单纯疱疹2型病毒诊断、分型、疫苗研究屮具有举足轻重的作用。HSV2的gG2存在于一段与HSV1的gG1基因高度同源的序列以及一段基因独特的保守区段。通过信息学软件预测发现具冇强抗原表位的gG2基因独特区位于285-482aaZ间的gG2基因［

7、3］ogG2基因的独特区段对于病毒的诊断和分型有着非常重要的意义。本研究对HSV2的gG2“独特区"(uniquegeneofHSV2gG2,gG2T)基因进行克隆、表达、纯化并对其抗原活性进行初步验证，为以gG2蛋口作为靶区域的型特异性诊断试剂和疫苗研发打下实验基础。1材料与方法1」病毒株HSV2病毒株由本课题组在性病门诊单纯疱疹病毒感染患者水疱屮分离培养，经gG2基因扩增、重组克隆的筛选与鉴定、重组基因组测序及序列分析，证实为HSV2病毒并保存于Vero细胞［3］。DH5a、BL21细胞出本实验室保存。重组HSV2/gG2T载体质粒由本实验室保存

8、。1.2主要试剂DNA纯化试剂盒购于中能博彩公司，ExTaq酶、dNTP购TTaKaRa公司，pGEX4T1