动物遗传学第十一章动物基因工程

《动物遗传学第十一章动物基因工程》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、动物基因工程（AnimalGeneticEngineering）第十一章第一节基因工程概述基因工程：是应用DNA重组技术，把供体细胞中的基因或基因组提取出来，按照预先设计的蓝图，经过体外加工重组，或者把人工合成的基因转移到受体细胞，并获得新的遗传特性的技术。基因工程的核心技术是DNA的重组技术，还包括基因的表达技术、基因的突变技术、基因的导入技术等。目的基因的获取；用工具酶对目的基因和载体进行加工处理，把目的基因与载体结合成重组DNA分子；把重组的DNA分子引入受体细胞，并使目的基因和载体上其他基因得以表达；转化体细胞的扩增、鉴定与筛选。基因工程的基本操作程序一、限制性

2、内切酶第二节基因操作中的工具酶(一)限制内切酶的概念限制性内切酶：简称限制酶，是一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。(二)限制性内切酶的命名属名＋种名＋菌株类型＋限制性酶种类(三)限制性内切酶分类(四)Ⅱ型限制性内切酶的基本特征在DNA分子双链的特异性识别序列部位切割，使DNA双链断裂。识别序列一般为4、5、6个碱基对。切割方式有两种：平头末端和粘性末端。常用限制性核酸内切酶的特性微生物名称酶名称识别顺序产生的末端类型BacillusamyloliquefaciensH解淀粉芽孢杆菌BamHⅠGGATCCCCTAGG5’突出B

3、acilliusglobigil球芽孢杆菌BglⅡACATCTTCTACA平头末端EscherichiacoliRY13大肠杆菌EcoRⅠGAATTCCTTAAG5’突出Haemophilusinfluenzae流感嗜血菌HindⅢAAGCTTTTCGAA5’突出Providenciastuartii164普罗威登细菌PstⅠCTGCAGGACGTC3’突出StreptomycesalbusSubspeciespathocidicus白色链球菌SalⅠGTCGACCAGCTG5’突出(五)Ⅱ型限制性内切酶的主要用途1、重组DNA分子2、绘制物理图谱二、DNA聚合酶三、D

4、NA连接酶(DNAligase)DNA连接酶可以催化带有粘性末端或平头末端的双链DNA中一条链的3'－OH与另一条链的5'－PO3H2形成磷酸二酯键而相连，从而构成一条完整的DNA长链。(1)两个双链DNA片段连接起来5ˊ-ACGAATTCGT-3ˊT4DNA连接酶5ˊ-ACGAATTCGT-3ˊ3ˊ-TGCTTAAGCA-5ˊ3ˊ-TGCTTAAGCA-5ˊ(2)修补带有缺口的双链DNA分子T4DNA连接酶重要的工具酶工具酶活性限制性核酸内切酶识别特异序列，切割DNAT4DNA连接酶催化DNA5ˊ-磷酸与3ˊ-羟基形成磷酸二酯键DNA聚合酶以DNA为模板合成DNA逆转

5、录酶以RNA为模板合成DNA碱性磷酸酶切除末端磷酸T4多聚核苷酸激酶催化核酸5'-羟基磷酸化末端脱氧核苷酸转移酶催化3'-端合成同聚体尾第三节基因克隆常用的载体载体(vector)：是把外源基因(目的基因)片断引入受体细胞，并在其中能自我复制的小型DNA分子。载体具备的基本特点：①在宿主细胞中能独立自主地复制；②表达载体含有强启动子，能驱动靶基因在宿主细胞中表达；③容易从宿主细胞中分离纯化；④载体DNA基因组中有一段不影响它们复制的非必需区域，插在其中的靶片段能被动地跟着载体DNA一起复制，就像载体的正常成分一样。载体的种类(按用途)1、克隆载体：以繁殖DNA片段为目的

6、的载体。2、穿梭载体：既能在真核细胞又能在原核细胞繁殖的载体。3、表达载体：用来将克隆的外源基因在寄主细胞内表达成蛋白质的载体。一、质粒(plasmid)1、质粒的概念：是细菌细胞染色体外存在于细胞质中能进行自我复制的一类小型DNA分子，大部分为双链环状。(一)质粒的一般性质2、质粒大小：相差很大(从小于1Kb到大于500Kb)，都有一个复制起点。5、质粒的宿主范围：窄宿主范围质粒(只能在一种特定的宿主细胞中复制)和广宿主范围质粒(复制起始点不特异，可以在许多细菌细胞中复制)。3、质粒的拷贝数：高拷贝质粒可以有10～100个拷贝，低拷贝只有1～4个拷贝。4、质粒的不亲和

7、性：也称不相容性，两种或两种以上亲缘关系密切的不同质粒不能够在同一宿主细胞中稳定地共存。(二)质粒的类型严谨型质粒——每个细胞中有1～2个拷贝，具有自身传递能力，分子量大。松弛型质粒——每个细胞中有10～100个拷贝，不具有自身传递能力，分子量小。基因工程常用此类质粒。常用的质粒有：pBR322、Psc101、ColE1、Psc134等。质粒载体一般能克隆10Kb左右的DNA片段。(三)理想质粒载体的基本要求能够在宿主细胞中大量自我复制，以便得到大量的重组DNA分子。具有一种或多种限制酶的单一切割位点，并在此位点插入外源DNA片段。分子量