高二生物 1.1《微生物的利用》学案（浙科版选修1）

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1、第一部分微生物的利用（是重点）一、课标内容：进行微生物的分离和培养二、教学要求：实验1大肠杆菌的培养和分离基本要求1，进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。2，进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。发展要求说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。说明实验2和实验3不作要求。三、知识要点：1，微生物是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞

2、核，只有一环状DNA分子（拟核）。以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。*2，细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少

3、，。划线最后，可使细菌间的距离加大。将接种后的固体培养基培养10～20小时后，一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞，形成菌落，不会重叠。在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株由于工程菌的质粒中通常有抗性基因（如抗氨苄青霉素基因），如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。涂布分离时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释到10-5～10-

4、7之间，然后去0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂。3，在培养微生物时，必须进行无菌操作。其首要条件是各种器皿必须是无菌的，各种培养基也必须是无菌的，转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌（防止杂菌污染）。

5、进行恒温培养时，要将培养皿倒置，是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落见相互影响，很难在分成单菌落，达不到分离的目的。4，细菌扩大培养要用LB液体培养基（通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业），划线分离要用LB固体培养基（常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存）。“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添

6、加蔗糖的豆芽汁即可。尽管培养基的配方各不相同，但其基本成分都一样（五类）。4（复习时注意联系微生物的有关内容）大肠杆菌的培养和分离重点知识记忆一．与培养基有关的知识：1.培养细菌的培养基是LB培养基，细菌扩大培养要用LB液体培养基（通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业），划线分离要用LB固体培养基（常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存）。2.“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定的氯化钠，以维持一定的渗透压。二．灭菌操作：在培养微生物时，必须进行无菌

7、操作。其首要条件是各种器皿必须是无菌的，各种培养基也必须是无菌的，（采用高压蒸汽灭菌法）转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中的每一步都要做到无菌（防止杂菌污染）。手要用酒精消毒，接种环用火焰灼烧，整个操作要在酒精灯旁进行。三．进行恒温培养时，要将培养皿倒置，是因为培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互影响，很难在分成单菌落，达不到分离的目的。分离后，应置于4℃下低温保存。4【考点1练习

8、】1．《大肠杆菌的培养和分离》实验前，所用的三角瓶口或试管口都要先塞上棉塞，理由是_____________________________,再经高压蒸汽灭菌才能使用。制作合格的棉塞的标准是___________________________。在配制培养基时，除考虑无菌外，一般要测_______，大肠杆菌要求在___________的环境下培养。配制LB固体培养基时，应在____________的培养基中，加入______________。将上述培养基分别加到三角瓶、试管或培养皿