石斛内生炭角菌DNA提取方法优化及分子鉴定

《石斛内生炭角菌DNA提取方法优化及分子鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、石斛内生炭角菌DNA提取方法优化及分子鉴定钟志敏赖小平黄松张桂芳广州中医药大学中医药数理工程研究院广东省中药新药研发重点实验室摘要：本文对石斛内生炭角菌DNA提取方法进行优化，并基于ITS序列及其ITS2二级结构对其进行分子鉴定。比较试剂盒法及不同浓度(2%、3%、4%)CTAB法的DNA提取效果并对CTAB法进行优化;进行TTS序列的扩增及TTS2二级结构的预测。结果表明：4%的CTAB提取效果最佳，优化的CTAB法大大缩短了DNA提取时间；ITS序列与炭角菌属3个种的相似度均为99%,ITS2二级结构仅与Xylariaarbuscula的二级结构100%相

2、似。本研究所优化的CTAB法能为后续相关研究提供便利;结合ITS序列及ITS2二级结构能对石斛内牛炭角菌进行准确的分子鉴定。关键词:石斛;炭角菌;优化CTAB法;菌种鉴定;作者简介：张桂芳，Ema订：zhanggf@gzucm.edu.cn收稿日期:2017-07-22基金：港澳台科技合作专项项目(2014DF1I30010)OptimizationofDNAextractionmethodsandmolecularidentificationofendophyticXylariafromDendrobiumZHONGLZhi-MinLAIXiao-PingH

3、UANGSongZHANGGui-FangMathematicalEngineeringAcademyofChineseMedicine,GuangzhouUniversityofChineseMedicine;Abstract：ThisstudyaimsatoptimizingDXAextractionmethodsofendophyticXylariafromDendrobiumandauthenticatingthefungusbasedonITSandsecondarystructuresofTTS2.Extract!oneffectsofkitmet

4、hodandCTABmethodatdifferentconccntration（2%、3%、4%）werecomparedemdCTABmethodwasoptimized.ITSsequencewasamplifiedandthesecondarystructureofITS2waspredicted.ResultsindicatedthatthebestextractioneffectwasderivedfromCTABatconcentrationof4%andtheoptimizedCTABmethodwasgreatlyreducedDNAextr

5、actionduration.TheITSsequenceofexperimcntaiXylariastrainTJ1showed99%similaritytothatofthreespeciesofXylaria,X.arbuscula,X.apiculataandX.venosula,whilethesecondarystructureofITS2ofthestrainshowed100%similaritytothatofXylariaarbuscula.TheoptimizedCTABmethodwillprovideconvenieneeoffutu

6、reresearchandtheendophyticXylariaofDendrobiumcanbeidentifiedaccuratcb^basedoncombiningITSsequcnccwithsecondorystructuresofITS2.Keyword：DendTobiuin;endophyticXylaria;optimizedCTABmethod;strainidentification;Received：2017-07-22石斛属Dendrobium是兰科Orchidaccac植物中仅次于石豆兰屈Bulbophyllum的第二大属，约有1

7、200-1500个种，其中大多数的物种都具有重要的药用价值和观赏价值。《中国植物志》第十九卷记载了我国76种石斛属植物，包括74种和2个变种（吉占和1999）o铁皮石斛由于其突出的药用和保健功效，被列入2015年版《屮华人民共和国药典》（赵燕宜等2015）o研究表明：石斛内生真菌对其种子萌发及幼苗生长具有促进作用（郭顺星等1997,1999;范黎等1999）,因此石斛内生真菌分离鉴定的研究，对于石斛植物的栽培和资源保护具有重要意义。炭角菌广泛分布于温带、热带、亚热带地区，大多数种腐生在被子植物上（Ko2009）,有些种类长在昆虫巢穴上（陈宛如等1995）,另外

8、还有一些种类是重要的植物和食用菌上的病