资源描述：
《例实验十二微生物菌种分离及初步鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、实验十二从酸奶中分离乳酸菌及初步鉴定一、实验目的：(1)了解乳酸菌的菌落特征及细胞形态；(2)了解乳酸菌的分离及鉴定原理。二、实验内容：酸乳中乳酸菌的分离及初步鉴定(1)从酸乳中分离乳酸菌；⑵对乳酸菌进行初步鉴定。三、实验器材：样品：含乳酸菌的酸奶；培养基：BCG牛乳培养基；设备：高压蒸汽灭菌锅，电磁炉，恒温培养箱；仪器用品：1000ml烧杯一个，500mlft筒一个，无菌培养皿12个，500ml容星三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml无菌试管7只，lml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根，无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种坏一个，天平，牛角匙，漏斗，
2、漏斗架，载玻片，盖玻片，pl【试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。药品：结晶紫，乙醇，草酸氨，碘，碘化钾，番红，番红，NaOH,NaClo三、实验原理：自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落屮获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养，分离，鉴定，保存各种微生物和代谢产物。此次分离纯化乳酸菌采用BCG牛乳培养基。乳酸菌分离H的是要在培养基上出现乳酸
3、菌的单个菌落，为此我们采用以下两种方法：平板划线法：平板划线分离法是将混杂在一起的微生物或同一微生物群体屮的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后繁殖成单菌落；从而得到待分离菌种的纯种。其原理是将微生物在固体培养基表面多次做”由点到线”稀释而达到分离的H的。平板涂布法：平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀舔液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。革兰氏染色法是根据细菌细胞壁成分不同，脱色效果不同从而可以将细菌区分为G+
4、和G-菌。通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌为乳杆菌和乳球菌的混合体。乳酸菌特征：(1)细胞为革兰氏阳性；(2)细胞的形态为球型或杆型；(3)消耗的葡萄糖50%以上产生乳酸。四、实验准备：1.培养基配制：(A)溶液：取脱脂乳粉50g,水250ml,加入1.6昭臭甲酚氯乙醇溶液0.5ml,混合均匀后分装入三角瓶于高压熬汽灭菌锅80°C灭菌20min；(B)溶液:酵母膏5g,水250ml,CaC035g,琼脂10g,加热溶解,用梢密pH试纸调节pH到6.8,分装入三角瓶后在121C高压蒸汽灭菌20Mino以无菌操作趁热将(A)(B)溶液均
5、匀混合。2.药品配制2.1结晶紫：结晶紫乙醉饱和液(结晶紫2g溶于20ml95%乙醇中)20ml,1%草酸氨水溶液80mlo将两液混匀，放置24小时后过滤即可。2.2卢哥氏碘液：碘lg,碘化钾2g,蒸憎水300mlo先将碘化钾溶于少量蒸憎水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸憎水300ml即成。2.3蕃红溶液：番红2.5g,95%乙醇100ml,溶解后存于密闭的棕色瓶中。用时取20ml与80ml蒸懈水混匀叩可。2.40.1%的吕氏美蓝染液:A液：美蓝0.3g,95%乙醇300ml；B液:0.01%KOH100ml。混合A和B液即成,按］:100稀释即可。2.4生理盐
6、水：称取9g氯化钠，溶解在少量蒸憎水屮，稀释到1000毫升。五、实验步骤：1.菌悬液的配制取1洁净三角瓶，盛以225ml生理盐水；7只洁净试管，各盛9ml的生理盐水；加塞包扎于在121°C高压蒸汽灭菌20Min,得到无菌生理盐水。将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌生理盐水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，使样品均匀分散，即为101的样品稀释液；将7只装9ml生理盐水的无菌试管，依次标记1010101010107,再用无菌移液管吸10】的菌悬液lml放入依次装有9ml无菌水的试筲中，稀释混匀便得到10*稀释液，如此重复依
7、次制得10’〜10丁的稀释液。2.倒平板取无菌平板12个，编号标明10：、101010"各三套；将经高温消毒的培养基冷却到50°C左右，按无菌操作法倒12只平板，每皿约15ml；平置使培养基均匀分布在皿底，待凝固。3.分离方法A.平板划线接种环挑取10】菌液，按无菌操作对标有”10'”的3个平板进行划操作；划线完毕后，盖上皿盖，倒置放在40C恒温培养箱中培养48小时oA.平板涂布用三支lml无菌移液管分别吸取10电10。和10"的稀释菌悬液各51,对号接种于与之对应的3个无菌平板中,每个平皿放0.lml；尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布均匀，平放于试验台
