whxge 推出富集多种蛋白的 mag 磁珠 sepharose

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1、GE推出富集多种蛋白的MagSepharose磁珠ProteinAMagSepharose，ProteinGMagSepharose和NHSMagSepharose是为简化免疫沉淀或pull-down应用中目的蛋白的富集而设计的磁珠。固定在MagSepharose磁珠上的抗体或其它蛋白用于目的蛋白的捕获，随后利用磁性装置收集磁珠。MagSepharose磁珠的主要优势在于：简化的操作•可见且密度大，易于辨认和收集结合的目的磁珠形式有着适合小规模实验的杰出性质。磁蛋白珠的高密度允许磁性装置的快速捕获，而磁珠的可见性确保了免疫沉淀/pull-down应用中

2、所有结合•非附着的磁珠避免了剪切作用和聚集物形的目的蛋白的可靠收集。这实现了低丰度目的蛋白成。使用时无需去污剂。样品的浓缩，从毫升降至微升。从25ml样品起始，•轻松捕获小体积或大体积样品中的目的蛋白可以获得体积低至2.5μl的富集产物。填料的特征（低至微升，高至毫升）总结在表1。•为富集/免疫沉淀目的蛋白而优化过的容量所有产品都提供了为下游分析（如——只需少量的抗体MALDI-ToF和LC-MS）的样品制备而优化的操作•灵活的步骤，洗脱条件为电泳和质谱分析而步骤。优化MagRack6最多能够制备1.5ml微量离心管每种磁珠目前都有两种包装规格：1×5

3、00μl所捕获的6个样品。当离心管放置在架子上时，磁浆体，适合20个样品；4×500μl，适合80个样品。珠在几秒钟内被吸引到磁铁上。这样能轻松去除上再加上MagRack6，一种处理微量离心管中磁珠清，而磁珠保留在管内。对于更大的样品体积，在的分离工具，每次能平行处理最多6个样品。结合目的蛋白时可使用50ml塑料管。在目的蛋白的初次捕获之后，推荐使用磁力贴，将磁珠转移至目的蛋白的可靠捕获更小的管中。或者可利用外摆式的离心机让磁珠旋ProteinAMagSepharose和ProteinGMag转下沉。Sepharose是亲和层析填料（树脂），带有蛋白A

4、为了操作更方便，还有ProteinA/GSpinTrap或蛋白G配体，这两者对单克隆或多克隆抗体都有BufferKit和NHSSpinTrapBufferKit可供选择。着高亲和力。MagSepharose填料的蛋白A或蛋白这些缓冲液试剂盒省去了耗时的缓冲液制备，从而G配体上固定的抗体可用于免疫沉淀中目的蛋白促进了快速、重复性高的蛋白富集。的捕获。NHSMagSepharose是为任何含有自由氨基的蛋白或生物分子的共价偶联而设计的，可用表1.ProteinAMagSepharose，ProteinG于多种类型的pull-down实验。点击索取说明书Ma

5、gSepharose和NHSMagSepharose的特征ProteinAMagSepharosewww.ebiotrade.com第15页，共29页下一页返回•基质顺磁、高度交联琼脂糖的球形颗粒对于ProteinAMagSepharose或ProteinGMagSepharose，有两种蛋白富集的操作步骤可供•配体天然的蛋白A选择：(1)交联步骤，其中目的蛋白被洗脱，而抗•结合能力8-17mg人IgG/ml凝胶体仍通过交联剂共价结合在基质上，(2)经典步•颗粒大小37-100μm骤，其中目的蛋白与抗体一起洗脱。•工作温度室温NHSMagSepharo

6、se是预先激活的，来自不同物种的蛋白、抗体和适体（aptamer）可通过主•储存液20%乙醇要的氨基共价偶联。在第二步中，目的分子被亲和•储存温度4-8°C捕获，并在交联步骤中洗脱。ProteinGMagSepharose蛋白富集的最佳参数取决于样品中存在的生物分子的特定组成。因此针对每种特定组成，需要•基质顺磁、高度交联琼脂糖的球形颗粒优化缓冲液，以便获得最佳结果。产品操作说明中•配体蛋白G列出了推荐的缓冲液。•结合能力13-22mg人IgG/ml凝胶重复性好的蛋白富集：标杆分析•颗粒大小37-100μm为了展示效率和重复性，通用电气医疗集团的•工作

7、温度室温实验室通过运行9次重复，评估了ProteinAMagSepharose。用Dynabeads™ProteinA（Invitroge•储存液20%乙醇公司）设立了平行实验，作为比较。•储存温度4-8°C利用兔抗人转铁蛋白的多克隆抗体，从非标记NHSMagSepharose的大肠杆菌蛋白背景下富集用Cy™5染料标记的•基质顺磁、高度交联琼脂糖的球形颗粒人转铁蛋白。对于两种填料，都采用了交联步骤，并根据产品附带的操作指南处理每种填料（表2）。•配体N-羟基琥珀酰亚胺洗脱的组分用SDS-PAGE（ExcelGel™）来分析，•结合能力8-14μmol/

8、ml凝胶用DeepPurple™总蛋白染料进行后染，并用Ettan™DIGEImager扫描。