14种病害的科赫法则试验

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1、下面文字，仅供参考14种病害的科赫法则实验从田间采回的患病植株上，可能会培养出多种微生物。分离出的微生物，可能是病原菌，也可能是二次侵入菌（secondaryinvaders），更可能是腐生菌（saprophytes）。欲证明病原菌的致病性（pathogencity），科赫法则（Koch'spostulates）是不二法门。科赫法则：（1）在病株患病部位常可发现可能的病原菌。（2）病原菌常可在培养基被分离培养(记录各项特征)。（3）纯培养的病原菌应接种至与病株相同品种的健康植株，并产生与病株相同的病征。（4）从接种的病株上以相同的分离方法应能再分离（reisolate

2、）出病原菌，且其特征与由原病株分离的应完全相同。严格地说，科赫法则并不能适用于所有的植物病原。绝对寄生性病原，如锈病菌、露菌、白粉菌、病毒等，即无法进行纯粹培养。因比必须以其它的方法分离、纯化或培养在生物体中，才能进一步证明其中病原性。例如锈病菌、白粉菌等可取单孢接种于适当的健康寄主组织以进行分离、纯化并培养，以鉴定其特性。虽然科赫法则费时、费力，却是不得不进行的验证。因为只有按照该法则才能证明病原菌的病原性，任何病害的病原菌若未经科赫法则或其它类似的方法证明其病原性，将不具任何说服力。（1）水稻纹枯病（Rhizoctoniasolani）分离：组织分离法或以菌核分离

3、分离用培养基：wateragar培养及保存用培养基：PDA接种法：菌丝块接种法（a）由纯粹培养的菌落，切取适当大小之菌丝块，置入水稻叶鞘内。（b）水稻植株套以大型塑料袋，保持高湿度1-2天。（c）连续观察1-2周，并记录病征。（d）以未接种菌源之培养基块为对照。（2）水稻白叶枯病（Xanthomonascampestripv.oryzae）分离法：划线平板法或稀释平板法分离用培养基：NA或PDA接种法：剪叶接种法（a）挑起纯培养的菌落至无菌水，形成悬浮液（略成混浊状）。（b）以灭菌的剪刀沾细菌悬浮液。（c）剪下部分水稻叶片。（d）水稻植株套以大型塑料袋，保持高湿度1-

4、2天。（e）连续观察1-2周，并记录病征。（f）以无菌剪刀沾无菌水剪叶以为对照。（3）水稻徒长病（Fuasriummoniliforme）分离法：组织分离法、稀释平板法或划线平板法。分离用培养基：WA或PCNBmedium培养及保存用培养基：cornmealagar或PDA接种法：种子接种法（a）以1%chlorox消毒水稻种子，并以无菌水漂洗。（b）一部分种子阴干，一部分催芽（浸泡无菌水24hr）（c）以无菌水制成孢子悬浮液（1×105spore/ml）（d）催芽种子浸泡在孢子悬浮液24hr后取出。（e）未催芽的种子浸孢子悬浮液后取出阴干。（f）上述种子分别种入土盆

5、中，连续观察病征1-4周并记录病征。（g）以无菌水取代孢子悬浮液为对照。（4）蕃茄青枯病（Pseudomonsasolanacearum）分离法：划线平板法或稀释平板法。分离用培养基：NA或TCCmedium培养用培养基：NA或523mrdium保存用培养基：NA或无菌水。接种法：剪根接种法（a）取蕃茄幼苗，洗净培养基质（蛭石或泥炭土）（b）以灭菌剪刀剪去根部尖端。（c）幼苗浸入无菌水配制的细菌悬浮液1hr。（d）将幼苗植入土盆中，连续观察病征1-4周并记录。（e）以无菌水浸剪根幼苗为对照。（5）蕃茄幼苗疫病（Phytophthoracapsici）分离法：组织分离法

6、或诱钓法分离用培养基：WA或Ko’smedium培养（产孢）用培养基：V-8medium或无菌水接种法：菌丝块接种法（a）取纯粹培养的菌丝块。（b）用胶带将菌丝块黏于蕃茄幼苗的茎部（菌丝面与组织接触）。（c）套上塑料袋以保持高湿度1-2天。（d）连续观察病征1-2周，并记录病征。（6）蕃茄萎凋病（Fuasriumoxysporumf.sp.lycopersici）分离法：组织分离法（取维管束变色部位）分离用培养基：WA或PCNBmedium培养（产孢）用培养基：PDB（potatodextrosebroth）：PDA不含agar即是PDB。Fuasriumoxyspo

7、rumf.sp.lycopersici于PDB中震荡培养3-5天，即可产生大量小孢子。保存用培养基：PDA接种法：浸根法（rootdipmethod）（a）培养病原菌3-5天的PDB离心收集孢子(3000rpm10min)。（b）弃PDB，并以无菌水洗孢子数次。（c）以无菌水悬浮孢子成悬浮液。（d）拔取蕃茄幼苗（造成根部伤口）。（e）浸入孢子悬浮液数分钟。（f）将幼苗植入土盆中，并将孢子悬浮液倒入土盆内。（g）连续观察l-4周，并记录病征。（h）以无菌水取代孢子悬浮液为对照。（7）蕃茄癌肿病（Agrobacteriumtumefaciens）分离法：