氨基酸、多肽、蛋白质和酶类药品检验

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1、第7章氨基酸、多肽、蛋白质和酶类药品检验氨基酸类药物含量测定常用的方法1.酸碱滴定法示例1：谷氨酸的含量测定示例2：赖氨酸片中赖氨酸的测定2.非水溶液滴定法示例：酪氨酸的含量测定3.定氮法示例：天门酰氨片的含量测定赖氨酸片中赖氨酸的测定中1)为什么要用NaOH调节pH为7.0？2）加入甲醛溶液的作用？3）是直接滴定还是其他的滴定方式？非水溶液滴定法非水溶液滴定法是在非水溶剂中进行滴定的方法。主要用来测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐，以及有机酸碱金属盐类药物的含量。也用于测定某些有机

2、弱酸的含量。非水溶剂的种类(1)酸性溶剂　　有机弱碱在酸性溶剂中可显著地增强其相对碱度，最常用的酸性溶剂为冰醋酸。(2)碱性溶剂　　有机弱酸在碱性溶剂中可显著地增强其相对酸度，最常用的碱性溶剂为二甲基甲酰胺。定氮法样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。4.碘量法或溴量法示例一：盐酸半胱氨酸水合物的测定示例一：L-胱氨酸的测定5.HPLC法示例一：三氨基酸注射液-3

3、41示例二：六氨基酸注射液4006.氨基酸自动分析仪碘量法原理：半胱氨酸分子中含有－SH，在酸性条件下，与过量的碘作用，剩余的碘用硫代硫酸钠溶液滴定。由硫代硫酸钠溶液所消耗的量，间接求出硫化物的含量。注意：滴定条件，指示剂，碘滴定液，Na2S2O3标液配制碘量法的背景知识(一)方法简介碘量法也是常用的氧化还原滴定方法之一。它是以I2的氧化性和I-的还原性为基础的滴定分析法。因此，碘量法的基本反应是由EӨ可知I2是一种较弱的氧化剂，能与较强的还原剂作用；而I-是一种中等强度的还原剂，能与许多氧化剂作

4、用，因此碘量法又可以用直接的和间接的两种方式进行滴定。1、碘滴定法(也称直接碘量法)电位比EӨI2/I—低的还原性物质，可以直接用I2的标准溶液滴定的并不多，只限于较强的还原剂，如：S2-、SO32-、Sn2+、S2O32-、AsO32-、SbO33-等。剩余碘量法在供试品中先加入一定量、过量的碘滴定液，待I2与测定组分反应完全后，再用硫代硫酸钠滴定液滴定剩余的碘，根据与药物作用的碘的量来计算药物含量的方法。2、滴定碘法(间接碘量法)电位比EӨI2/I—高的氧化性物质，可在一定的条件下，用碘离子来

5、还原，产生相当量的碘，然后用Na2S2O3标准溶液来滴定析出的I2，这种方法叫做间接碘量法或称为滴定碘法。例如K2Cr2O7在酸性镕液中与过量的KI作用，析出的I2用Na2S2O3标准溶液滴定。Cr2O72-+6I-+14H+＝2Cr3++3I2+7H2OI2+2S2O32—＝2I-+S4O62—利用这一方法可以测定很多氧化性物质,如ClO3-、ClO-、CrO42-、IO3-、BrO3-、SbO43-、MnO4-、MnO2、AsO43-、NO3-、NO2-、Cu2+、H2O2等等，以及能与CrO

6、42-生成沉淀的阳离子，如Pb2+、Ba2+等，所以滴定碘法的应用范围相当广泛。碘量法常用淀粉作指示剂，淀粉与碘作用形成蓝色络合物，灵敏度很高，即使在5×10—6mol/L溶液中亦能看出。淀粉指示剂应在近终点时加入，因为当溶液中有大量碘存在时，碘可被吸附在淀粉表面，影响终点的正确判断。碘滴定液(0.1mol/L)I2=253.8112.69g→1000ml【配制】取碘13.0g,加碘化钾36g与水50ml溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000ml，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。碘量法的主要误差来源，一

7、是I2易挥发，二是I-易被空气中的氧所氧化。为防止I2挥发，应采取以下措施：1.加入过量KI，KI与I2形成I3—，以增大I2的溶解度，降低I2的挥发性，提高淀粉指示剂的灵敏度。此外，加入过量的KI，可以加快反应的速度和提高反应的完全程度。2.反应时溶液的温度不能高，一般在室温下进行。因升高温度增大I2的挥发性，降低淀粉指示剂的灵敏度。保存Na2S2O3溶液时，室温升高，加速Na2S2O3的分解。3.析出碘的反应最好在带塞的碘量瓶中进行，滴定切勿剧烈摇动。为防止I-被空气中的氧所氧化，应采取以下措

8、施：1.避光光线能催化I—被空气氧化。2.溶液pH值的影响S2O32—与I2之间的反应必须在中性或弱酸性溶液中进行。因为在碱性溶液中，I2与S2O32—将会发生下述副反应：S2O32—+4I2+10OH—＝2SO42—+8I—十5H2O而且，I2在碱性溶液中还会发生歧化反应：3I2+6OH—＝IO3—+5I—+3H2O如果在强酸性溶液中，Na2S2O3溶液会发生分解：S2O32—+2H+＝SO2+S↓+H2O同时，I—在酸性溶液中也容易被空气中的O2氧化：4I—+4H++O2=2I