提高羊水细胞培养成功率的方法

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1、西部医学2011年5月第23卷第5期MedJWestChina，M△Q11，Vo1．231No．5·965·提高羊水细胞培养成功率的方法么伟，许晓芬，岳霞。，张丽娜(1．河北省复员军人医院检验科，河北邢台054000；2．镇江市妇幼保健院，江苏镇江212000~3．邢台医学高等专科学校，河北邢台054000)【摘要】目的探讨羊水细胞染色体培养及提高培养成功率的改良方法，更好地满足临床诊断的需要。方法对孕16～21周孕妇实施羊膜腔穿刺术抽取羊水，用改良后的方法进行细胞培养及染色体收获。结果对符合产前诊断指征的83例标本进行接种，培养成功率100。83例标

2、本中共发现4例染色体异常核型，检出率为4．82。其中21三体综合征1例，平衡易位1例，罗伯逊易位2例。结论改良后培养成功率基本达到100o,4，成功率较之前有明显提高。【关键词】产前诊断；羊水细胞培养；染色体核型分析；分裂相【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】DOI：10．3969~．issn．1672—3511．2011．05．072羊水细胞培养及染色体制备是染色体病产前诊一次性移液管最好，减少了细菌污染的机会)充分吹断的主要手段，自1966年Steele，Breg[]首次报道培吸打匀，分别接种于25cm2方形培养瓶(美国cor—养羊水

3、细胞成功，并应用于胎儿染色体疾病的产前诊ning)，并拧松瓶盖卧倒置于37℃恒温5CO培养箱断。至今此项技术仍在产前诊断中起着元可替代的中开放式培养即可。要根据细胞生长的状况来决定作用。近年兴起的基因诊断由于特异性强、设备要求收获的时间，一般5天后，在显微镜下观察细胞生长高、监i贝0范围窄、实验影响因素多等缺陷仍无法取代情况，可见成纤维样或上皮细胞生长，当细胞生长旺羊水细胞培养与核型分析在产前诊断中的价值与地盛，在贴壁细胞层的背景上出现圆形细胞时在有较好位。但由于羊水细胞培养一直存在技术要求高、难度的梭形细胞克隆的情况下换上完全培养基，换液后培大、培养

4、时间长、易污染、分裂相少等问题，许多医疗养24~48小时，如细胞生长状况好，可加入秋水仙素单位仍未能开展羊水产前诊断工作。近十年来，随着0．04～O．08g(一毫升注射器垂：直加入20fg／ml秋羊水细胞的培养及其在染色体制片上的不断改进和水仙素两滴)，4～6小时后进行细胞学处理。完善，其已经逐渐在地市级医院推广开来。由于羊水1．2．3羊水细胞收获采用胰酶和EDTA1：1混培养的影响因素较多，各实验室根据自己的现有条件合消化(0．25EDTA-trypsin)。细胞间的连接依赖(包括当地的气候如温度、湿度等)，建立一套适合自于Ca抖、M+存在，由于ED

5、TA是Ca外、M+的螯己的培养方法尤为重要。2009年1月～12月，我室合剂，EDTA能结合细胞间及细胞与瓶壁间的Ca抖、通过外出学习以及不断探索和改良，根据本实验室现Mg抖，使细胞连接松散，消化吹打后容易分散成单个，有条件逐渐摸索出了一套较为成功的羊水培养方法，便于充分进行低渗。可明显提高羊水培养的成功率，把失败几率降到最1．2．4低渗将0．5ml悬液管中加入已预温置小，现报告如下。37℃的0．75MKCI低渗液4～6rnl，用滴管轻轻吸打，1资料与方法使其混匀，置37℃水浴箱中低渗5min后，加入新鲜1．1资料来源83例经产前筛查提示高危者和遗传配

6、置(甲醇：冰醋酸3：1)固定液1．5ml预固定，用滴咨询门诊的不良妊产史的孕妇年龄26～40岁，孕周管轻轻吸打，使其混匀37℃离心，水浴5min，150016~-21周，在孕妇知情同意后实施羊膜腔穿刺术。rpm离心10min。1．2方法1．2．5固定去上清，加入固定剂8ml，轻混匀，1．2．1羊水采集方法B超引导定位，无菌条件下，37℃水浴10min，室温1500rpm离心10min，去上采用7号腰穿针穿刺。最先用5ml注射器抽取2m1清，约留0．5mt，重复固定1次。羊水弃去，再换1Oml注射器抽取羊水共20~30ml，1．2．6制片离心吸去上清液，

7、留0．5ml制成细胞分别注入一次性无菌离心管中，立即送检。悬液，或吸净上清液，加入0．5ml新配的固定液，用细1．2．2羊水细胞培养以1500rpm(500~800g)离长玻璃管小心吹打后吸出一滴，滴在从冰箱冷冻层中心10min，弃去上清液，保留每管0．5ml羊水细胞层，取出来的免洗玻璃片上，一般每片两滴，滴6张片(染吸管打散细胞，加入4．5m1羊水培养基(用移液枪和4张，两张备用)。放入75℃干燥箱干燥后，在显微镜·966·西部医学2011年5月第23卷第5期MedJWestChina，MAY2011，Vo1．23，No．5下观看染色体分散情况。3．

8、2培养中的五个“二”培养必须两个人接种；使1．2．7制带如果染色体形态良好可做G带。先将用不同