GTC实验室的操作程序1

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1、GTC实验室的操作程序一、精液采集人工授精与自然交配的根本不同在于，自然交配中许多公猪的工作，在人工授精中都由人工授精技术员来完成了。在人工授精中，技术员必须提供良好的精液处理、包装条件，以保证精子能够维持较高的受精能力。所以要求人工授精技术员要能够很好的理解精子生产的自然过程，以便能够在人工授精实验室尽可能的模仿这个过程。（一）、采精时需要的设备1、采精容器，应该使用那些能够保温并且容易消毒和清洗的容器。2、牛奶过滤纸或手术消毒纱布。3、一次性乳胶手套或尼龙手套。注意，有些种类的手套对精子有毒害作用。4、消毒、干燥以及贮存设备。（二

2、）、采精1、即使使用手套，也要在采精前洗净并擦干采精的手。2、排空积尿，用干净的毛巾擦净公猪的下身。3、引导公猪爬上假台畜。换下脏手套，换上干净的手套。4、用戴手套的手抓住其阴茎，模仿母猪的子宫颈形成一个有力的螺旋，锁住阴茎并顺势拉出。61、一旦成功，公猪将稳定下来，开始射精。射出精液可分为几个不同的部分。--首先的胶体部分：不要收集，其中的精子很少。--清亮部分：含有的精子很少，不必收集。--富精部分：呈乳状，含有大部分精子，需要完全收集。--最后的胶体部分：不要收集。2、要注意避免包皮液、尿液混入到射出精液中，在采精过程中包皮液会

3、沿着阴茎流下来混入精液中，杀死精子。可以用纸巾缠绕在阴茎上，避免这个问题。3、公猪射精的时间可能持续5-15分钟。因此要有耐心，在公猪完全射精完毕之前不要松开采精的手。4、采精后马上冲洗采精区，否则干了的精液和胶体很难清洗。二、精液的处理精液处理的目的，就是以一种高效、低成本的方法来最大数量地获取高质量精液头份数。（一）、人工授精实验室所需的基本设备1.显微镜：应包括100倍，400倍1000倍物镜（油镜），双筒目镜，恒温载物台。2.盖玻片，载玻片和毛细吸管。3.电子称4.温度计：两根30cm（12英寸）的温度计。5.若干广口容器：体

4、积从1L到5L的玻璃或塑料广口容器。61.精液包装设备2.光密度仪3.水浴锅：用来控制稀释液的温度。4.精液分装袋或输精瓶及瓶盖。5.精液贮存设备6.消毒设备7.输精管：橡胶输精管或一次性输精管。8.净水制造系统9.烘干设备：用来干燥和贮存所有采集和检测精液用的设备。（二）、精液质量的评估精液的质量评估应在采精后立即进行。有些评估项目在精液稀释前进行，而有些评估项目要在精液稀释后进行。原精检测项目稀释后的检测项目气味、体积稀释后活力数量、最初活力、贮存后活力最初形态混合精液的活力1.测原精活力6用显微镜将原精样本放大到100倍和400

5、倍来评估原精活力。观察的时候要选取载玻片上的几个不同点，以使样本具有代表性。如果原精活力不高，在0分-1分之间，那就再制作一个样本，但必须保证载玻片盖玻片以及吸管的温度为35℃。2．稀释后精液的活力取一滴稀释后的精液，放在显微镜下，可观察到样本中的单个精子，稀释精液的活力可以用样本中，向前直线运动精子的百分比表示。如果活力低于60%就抛弃原精。（三）、稀释精液精液稀释有两个原因：增大体积以提高其利用率；为精子提供一个有利于保存的环境。1．准备稀释液用电子称准确称取需要量的稀释剂。要遵照生产商说明的使用量来做。注意不正确的稀释液浓度将会

6、杀死精子。在称取好所需量的稀释剂粉剂后，把其加入到一定量的蒸馏水中。预热蒸馏水到30℃-35℃，这可使稀释剂溶解的更快。准备每日用量的新鲜稀释液，不要在其配制好，超过24小时以后再使用；稀释液最好在配制好60分钟以后使用。2．稀释精液使稀释液和精液温度相同是很重要的。在稀释精液前，测量精液和稀释液温度（精液温度大约为35℃），如果两者温度相差不超过±1℃6，就可将适量的稀释液加入到精液中，并将两者轻柔混匀。每包装头份应至少含有20亿个有效精子，至多含有45亿个有效精子，输精体积至少为70ml。一旦精液被稀释好，就可进行分装了。分装好后

7、，贴好写有采精日期、公猪耳号的标签。然后发送或将其贮存在15℃-20℃的精液贮存箱中。（四）、精液的贮存和运输1．稀释精液的贮存最好的精液贮存方法，是将其贮存在温度设置在15℃-20℃的温控箱中。有些稀释后的精液在贮存期间会沉淀、聚集，所以应该每日摇匀精液两次。稀释的精液在贮存2-3日后，有效精子数将会减少，因此在使用前需要检查精液的活力，以确保使用的精液活力大于60%。在略低的温度下（15℃-20℃）可延长精子的存活期。这是因为降低温度可使精子的代谢水平降低，较低的代谢水平将会消耗较少的营养物质，产生较少的废物，从而延长精子的寿命；

8、但低于15℃的温度将会损害精子。猪的精子比其他动物的精子对于低温更为敏感，而高于20℃的温度将不会降低精子的代谢水平，因此，密切注意并控制精液贮存期间的温度变化对于维持精液的活力是很重要的。1.精液的运输当精液需要从其采