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1、July15,2021SMARTerTMRACE技术介绍南宁科迪生物技术有限公司主要内容July15,202121SMARTerTM技术2SMARTerTMRACE3实验操作介绍July15,202131SMARTerTM技术一步RT，一步PCR轻松获得全长双链cDNADNApolextends3’ends,displacingnextRNApieceAAAAA5’3’(start)(stop)mRNAtranscript(polyA+RNA)AAAAA5’3’TTTTTTTTTTAAAAAAAAAATTTTT3’5’AAAAATTTTToligoprimer5’3’Prime
2、mRNAwitholigoprimerRTextendsprimerRNaseHDNApolDNALigaseSecondStrandEnzymeCocktailRNaseHcreatesnicksinRNALigaseligatessegments“GublerandHoffmanprocedure”(Gubler,U.&Hoffman,B.J.(1983)Gene25:263-269)传统cDNA合成技术July15,20214July15,20215AAAAAAAAATTTTTTTTAAAAAAAAATTTTTTTTCCCAAAAAAAAATTTTTTTTGGGCCCAA
3、AAAAAAATTTTTTTTGGGLD-PCRCCCAAAAAAAATTTTTTTTGGGRT反应SMARTer双链cDNA合成原理示意图SMARTTM技术SMARTTemplateRNASwitchingMechanismAttheendofJuly15,20216末端转移酶活性自动转换模板功能SMARTScribeTM反转录酶XXXXX第一链cDNA各种应用RACEPCR,qPCR文库构建消减杂交新一代测序探针制备正义RNA扩增PCR扩增dscDNAJuly15,20217July15,20218SMARTer使您更轻松的获得5’端GettingSMARTerJuly15
4、,202192SMARTerTMRACESMARTTM技术SMARTTemplateRNASwitchingMechanismAttheendofJuly15,202110末端转移酶活性自动转换模板功能SMARTScribeTM反转录酶SMARTerTM技术概要SMARTScribeTM逆转录酶获得更长的第一链cDNA灵敏性更高升级版SMARTerIIAoligo提高PCR产物的产量SMARTerRACEKits包含随机引物可进行polyA—RNA的5’RACE实验July15,202111图1.SMARTScribeTMRT获得更长的第一链cDNA。polyA+RNA为模板。
5、SMARTScribeTMRT—合成更长的第一链cDNAJuly15,202112SMARTScribeTMRT—获得最长14.6kb的片段July15,202113图2.利用SMARTScribeRT和合成的RNA为模板进行RT-PCR分析。合成的RNA模板进行一系列的梯度稀释后，样品中含有105-10RNA的拷贝。在的RNA模板中添加50ng的HeLa细胞总RNA，以增加模板的复杂度。使用Advantage®2DNAPolymeraseMix合成第二链。36个循环后获得350bp片段。SMARTScribeTMRT—灵敏度高LaneM:100bpDNAsizemarker.
6、SMARTScribeRT可以从低至10个RNA拷贝中合成第一链cDNA。July15,202114July15,2021TitleofthePresentationcangohere15SMARTerRACE1.步骤简单（就是RT+PCR）。2.不用纯化核酸，降低降解几率，获得更长序列3.起始模板量小，50ngtotalRNA即可，低至10ng。也无需用DNase来处理RNA。4.抑制性PCR设计，有效抑制非特异性扩增及单引物扩增。5.应用SMART技术，发高因子paper。6.5’RACE、3’RACE都能做。富集5’端，产物更好分析。7.可以对无polyA尾的样品进行RA
7、CE。SMARTerTM技术优势July15,2021163Clontech试剂盒SMARTerTM技术相关产品SMARTerTMRACE合成更长cDNA合成芯片用荧光探针新一代测序线性扩增mRNA构建cDNA文库July15,202117SMARTerRACE试剂盒SMARTerRACE最终结果是获得5’端和3’端序列July15,202119HumangeneSizeofmRNA(kb)+(bp)*MatchesgenomicsequencesIncludesTranscriptions
