《抗体的不均一性》PPT课件

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1、抗体的不均一性如何获得抗体：用一种纯抗原免疫动物，便可获得与该抗原专一结合的抗体。即免疫动物的抗血清。用50%饱和度的硫胺沉淀，继而用DEAE-纤维素柱离子交换层析，可获得纯的IgG类抗体（或其他类抗体）。这只是类别的纯化，并未获得均一的抗体，它包括对此抗原专一性和非专一性在内的全部IgG类抗体，而对抗原专一性的抗体只是其中的一部分。再用抗原偶联的免疫亲和吸附柱纯化此IgG抗体，便可获得对此类抗原专一性的抗体但也还是不均一的，它是抗原分子内各决定簇诱导的IgG类抗体的总和。在抗体结构分析和结构与功能

2、的关系的研究中需要纯化为均一的抗体。机体内产生抗体的Ｂ淋巴细胞克隆（clone），其基因型是各不相同的，这种遗传性的差异导致了抗体的多样性，故从免疫血清中分离均一抗体是不可能的。也正因此延缓了对抗体分子结构的研究。多发性骨髓瘤是一种Ｂ淋巴细胞癌变的疾病，在病人血清中的骨髓瘤蛋白是一个突变的浆细胞的无性繁殖系的产物，可称之为单细胞株蛋白质，其浓度比其他免疫球蛋白高几倍，易于分离纯化，制备出均一的瘤蛋白。在抗体分子结构的早期研究中都是以此为材料，先后搞清了IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类免疫

3、球蛋白和它们的亚类的基本结构。利用Ｂ淋巴细胞克隆与瘤细胞杂交的单克隆抗体技术，能提供出均一的免疫球蛋白，也可进行抗体分子结构的研究。单克隆抗体一.多克隆抗体（polyclonalantibody）：指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。如:免疫血清（含多种特异性抗体）。实际意义：（1）预防、治疗感染性疾病，如：破伤风抗毒素血清抗破伤风，胎盘球蛋白抗病毒感染等，副作用：超敏反应（2）临床诊断，如：肥达氏反应---伤寒、副伤寒，缺点：特异性差。二.单克隆抗体（mon

4、oclonalantibody,McAb）由单一克隆B细胞杂交瘤产生的，只识别抗原分子某一特定抗原决定簇的特异性抗体。特点：具有高度均一性。杂交瘤细胞：骨髓瘤细胞---无限增殖；免疫B细胞---合成、分泌特异性抗体。杂交瘤技术---HAT培养基：次黄嘌(H),氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)。实际意义：（1）抗原的纯化和结构分析；（2）细胞发生、分化及功能的阐明；（3）临床疾病的诊断和治疗，如：免疫分子检测；免疫导向药物治疗恶性肿瘤---McAb抗癌药物(毒素或放射核素偶联)。引起抗体不均一的原因

5、可分外源性和内源性两种。一、外源引起的抗体不均一性细菌、病毒等病源微生物都具有多种多种的蛋白质分子，蛋白质分子结构的复杂性，使之具有多种抗原决定簇，而每一个抗原决定簇可以诱导一种抗体，于是，动物机体产生的抗血清包含着针对各个决定簇的许多不同抗原特异性抗体和针对同一抗原决定簇的不同类别的抗体的总和。因此抗血清是一个复杂的混合物。抗体的这种异质性，反映出机体对抗原物质的精细结构的识别能力，是机体对抗菌素原物质免疫应答的细微之处。抗体的这种异质性，对治疗血清的制备、疫苗的研究等方面提供了理论基础。如图所示

6、，分析出它的毒性基因，可以制备中和毒素的动物血清，用以临床治疗；它的吸附感染基因可以作为疫苗，诱导机体自动免疫，利用抗体的封闭作用，使机体的组织细胞不被侵入。二、内源引起的抗体不均一性免疫球蛋白分子化学结构的差异必然要反映在蛋白质的抗原性上。抗体的不同结构形成不同抗原决定簇，诱导出不同特异性抗体（亦可称抗抗体）。利用抗血清（抗抗体）来鉴别和区分免疫球蛋白及其肽链（重链和经链），无疑是可行的，而且是极为简便的。据此，免疫球蛋白可根据血清学检测法分为不同的血清学类型。同一物种内所有个体的免疫球蛋白共同具

7、有的抗原专一性称为同种型（isotype），也称同族专一性；同一物种内不同个体存在几种形式的抗原专一性，在同一物种内的这种多型现象称为同种异型（allotype）；每一形成抗体的克隆细胞所产生的抗体上，都具有自身独特的抗原专一性，称为个体型，也称为独特型（idiotype）。形成这些抗原专一性的抗原决定簇如图所示。同族专一性的抗原决定簇位于C区，是不同的结构基因的产物。同种异型是特定基因座的等位基因产生，相当于C区个别氨基酸残基的置换。独特型位于V区，包含结合位点的抗原决定簇。1．同种型（istyp

8、e）：是指同一物种内所有个体共同具有的免疫球蛋白分子的抗原专一性，因此这种专一性因种而异。由于同种型的存在，人们可以用鼠的IgG免疫家兔，产生兔抗鼠IgG，家兔的这种特异抗体也可称为抗抗体（既二抗）。反之，也可产生鼠抗兔IgG。目前生产的这些抗抗体，在临床检测和生物学研究中，都是重要的检测试剂。2．同种异型（allotype）：在同一种属内出现的免疫球蛋白异型现象，称为同种异型。以人类为例，它的免疫球蛋白的某类和亚类如IgG，在一群人中的重链γ1的结构和另一群人不相同