《色谱条件的选择》PPT课件

《《色谱条件的选择》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、色谱条件的选择－讲稿山东大学王吉顺2005.8色谱条件包括以下内容：1.仪器：生产商，型号2.色谱柱：柱商品名称，填料商品名称，填料类型，色谱柱长度（cm）和内径（mm），填料粒经（um）3.流动相：流动相组成和比例，流速（ml/min）4.检测器：型号及参数（如波长nm）5.进样量：体积（ul）6.柱温：（℃）其中我们更为关心的是：色谱柱和流动相（本章节主要讨论的问题）色谱柱的选择大多数化合物是可以使用C18柱分离C18优点：柱便宜，流动相便宜，使用时间长，易于通过改变流动相得到最佳分离，药品本身具有纯度高的特点，容易分离，辅料和分解产物是分离的难点。比中药成分的分离

2、，体液中药物成分的分离，微量成分的分离，杂质成分的分离，食品中药物残留的分离简单的多。选择色谱条件的方法1．查文献，学习别人的方法2．文献中没有的新药和新化合物可以使用结构类似化合物的色谱条件3．自己积累药物分析的色谱条件，从中寻找规律，尤其是要总结解决问题的方法。把自己积累的方法用于以后的色谱分析中。不建议在自己对被分离物质的性质不了解的情况下，自己摸索色谱条件色谱柱的分类1．根据担体材料分类（1）硅胶型：SiO2；C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯基（2）聚合物型：聚苯乙烯类（离子交换；凝胶色谱柱）；聚丙烯酸酯（离子交换）；聚乙烯醇：C18；离子

3、交换（3）钛柱：比硅胶型的稳定性提高（4）其它类型色谱柱的分类2.根据分离方式分类(1)正相：SiO2；CN；NH2；苯基(2)反相：C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯基(3)离子交换：弱碱阴离子交换；弱酸阳离子交换强碱阴离子交换；强酸阳离子交换(4)凝胶过滤：水溶性凝胶过滤；油溶性凝胶过滤(5)其它类型：手性柱等色谱柱的分类3.根据色谱柱尺寸分类（1）10cm～50cm内径为制备柱（2）4cm～8cm内径为标准柱（3）3cm一下内径为小孔柱或微孔柱和毛细管柱（4）柱长一般为15cm、25cm、30cm；50cm一般用于制备柱或特殊柱型，5cm一下为

4、快速柱(包括预柱和保护柱)色谱柱选择方法1.氨基酸(1)结构特殊，一般使用离子交换柱分离，阳离子交换柱是使用最广泛,是最成熟的方法。分离氨基酸的阳离子柱分为锂型柱和钠型柱，锂型柱可以分离谷氨酰胺和谷氨酸。(2)反相柱也可以分离氨基酸，但不能分离所有氨基酸。柱前衍生化法分离水解氨基酸也非常有效，且方法简便，所用的仪器简单。氨基酸分析分析条件：色谱柱：Shim-pakISC-07/S1504Li（15cm×4.0mm）（Li型磺酸基，氨基酸分析专用柱）流动相：柠檬酸缓冲溶液，梯度洗脱流速：0.3ml/min柱温：55℃检测器：荧光（Ex.238nm,Em450nm）方法：O

5、PA柱后衍生化法色谱柱选择方法肽和蛋白质凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离蛋白质分析条件：色谱柱：Shim-pakDiol－300（50cm×7.9mm）（二醇基水溶性凝胶柱，蛋白质分析专用柱）流动相：10mM磷酸缓冲液（pH＝7）和0.1MNaCl流速：1.0ml/min柱温：室温检测器：紫外（280nm）色谱峰：1.谷氨酸脱氢酶2.乳酸脱氢酶3.烯醇酶4.腺苷酸激酶5.细胞色素C蛋白质分析条件：色谱柱：Shim-pakDiol－30

6、0（50cm×7.9mm）（消除残留硅醇基C2柱，300A多孔硅胶）流动相：硫酸铵/磷酸缓冲液（pH＝7）梯度洗脱流速：0.5ml/min柱温：室温检测器：紫外（220nm）色谱峰：1.细胞色素C2.肌红蛋白3.核糖核酸酶A4.铁传递蛋白5.糜蛋白酶原A色谱柱选择方法核酸核酸在生命科学领域中占有重要位置，在今后的新药研发领域中同样占有重要位置。核酸可以分为一下三类：腺嘌呤（核酸碱基）腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）腺嘌呤（核酸碱基）和腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）用阳离子交换柱或反相柱进行分离；腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）用阴离子交换柱分离，选择合适的

7、流动相也可以用反相柱进行洗脱；核酸分析条件：色谱柱：Shim-pakWAX－1（5cm×4.0mm）（叔氨基阴离子交换柱，用于分析核苷酸）流动相：20mM磷酸缓冲液（pH＝7）480mM磷酸缓冲液（pH＝6.8）梯度洗脱流速：1.0ml/min柱温：45℃检测器：紫外（260nm）色谱峰：1.尿苷酸2.胞苷酸3.腺苷酸4.鸟苷酸5.尿苷二磷酸6.胞苷二磷酸7.腺苷二磷酸8.尿苷三磷酸9.鸟苷二磷酸10.胞苷三磷酸11.腺苷三磷酸12.鸟苷三磷酸核酸分析条件：色谱柱：Shim-pakSBC－C8（15cm×2.5mm）（小孔径硅胶键合C8）