DB34T 1360-2011 饲料中地克珠利的测定高效液相色谱法

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1、ICS65.120B46DB34安徽省地方标准DB34/T1360—2011饲料中地克珠利的测定-高效液相色谱法Determinationofdiclazurilinanimalfeed-Highefficiencyliquidchromatographymethod2011-03-16发布2011-04-16实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1360—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省畜牧兽医局提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准

2、起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准主要起草人：吴蕾、张莉、刘红云、明文庆、蔡一杰、丁作坤、陶小平、钱志平、吴昊。IDB34/T1360—2011饲料中地克珠利的测定-高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中地克珠利检验的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饲料中地克珠利的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682

3、分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样3试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中，室温保存，备用。4原理试样用四氢呋喃及甲醇提取，以乙腈-0.2％磷酸水溶液(63∶37)为流动相，高效液相色谱仪进行分析，外标法定量。5试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级水的规定。5.2地克珠利对照品：纯度≥99.7％。5.3标准储备液：精密称取地克珠利对

4、照品适量，用25mL四氢呋喃溶解，加甲醇定容至100ml容量瓶，摇匀，配制成浓度为0.1mg/mL的标准储备液，2℃～8℃避光存放，备用，有效期90d。5.4标准工作液：精密量取5.2项下储备液至100ml棕色容量瓶中，加甲醇定容稀释成0.1、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0μg/mL浓度不等的地克珠利标准工作液。过0.45μm滤膜，备用。5.5甲醇：色谱纯。5.6四氢呋喃。5.7乙腈：色谱纯。5.8磷酸。5.9微孔滤膜：孔径0.45μm，有机相。6仪器设备1DB34/T1360—2

5、0116.1高效液相色谱仪(配紫外检测器)6.2分析天平：感量0.0001g，0.001g。6.3饲料粉碎机。6.4旋转蒸发器。6.5超声波清洗机。6.6离心管，50mL。6.7梨形瓶，50mL。7测定步骤7.1试样提取称取5g（精确至0.001g）粉碎后的饲料样品，置50mL离心管中，加入10.00mL四氢呋喃，再加入40.00ml甲醇，超声提取30min，5000r/min离心15min，取上清液25.00mL，于50℃水浴中旋转蒸发至干，加甲醇1.0mL溶解，过0.45μm滤膜过滤后供高效

6、液相色谱测定。7.2色谱条件色谱柱：C18(250×4.6mm，5μm)或性能相当的色谱柱。流动相：乙腈-0.2％磷酸水溶液(63∶37)。流速：1.0mL/min。进样体积：10μL。检测波长：241nm。7.3上机测定取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算按照下式计算试样中药物的含量：A×Cs×V×1000X=×n................................(1)As×m×1000式中：X——中药物的含量，单位为毫克每千克

7、（mg/kg）；A——样溶液对应的色谱峰面积响应值；As——准溶液对应的色谱峰面积响应值；V——容体积，单位为毫升（mL）；Cs——准溶液的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m——样质量，单位为克（g）；n——释倍数。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9检测方法灵敏度、准确度、精密度2DB34/T1360—20119.1灵敏度本方法在饲料中的检出限为0.5mg/kg。9.2准确度本方法在添加浓度为1.0mg/kg时，回收率为80％～120％。9.3精密度本方法的批内变异系数

8、CV≤10％，批间变异系数CV≤15％。3DB34/T1360—2011AA附录A（资料性附录）地克珠利标准溶液色谱图图A.1地克珠利标准溶液色谱图_________________________________4