新型隐球菌分子分型

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1、万方数据2010。26(9)中国人兽共患病学报ChineseJournalofZoonoses867文章编号：1002—2694(2010)09—0867—03新型隐球菌分子分型进展吴媛(综述)，卢金星(审校)中图分类号：R379．5文献标识码：A隐球菌是一种主要侵犯人中枢神经系统，引起隐球菌病的深部真菌’13。隐球菌属包括17个种和8个变种，其中新型隐球菌是主要的致病菌。新生隐球菌是广泛存在于自然环境中，其中以从鸽粪中分离出的新生隐球菌被认为是人类感染的最重要来源=21。近年来该病的发病率呈明显上升趋势，尤其在AIDS病人中，高达30％∞1。

2、特对新型隐球菌的分子分型方法进行概述。上世纪80年代前。Kwon—Chung等人将新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)分为3个变种，即格鲁比变种(C．grubii)，新生变种(C．neofor—roans)和格特变种(C．gattii)“’。但研究发现．格特变种在生态生化和分子特征方面同前两个变种有较大差异，因此，他们在2002年将格特变种上升到种的概念∞。6’。即新型隐球菌分为两种：新生隐球菌(C．neoformans)和格特隐球菌(C．gattii)；其中前者又分为3个变种：新生变种、格鲁比变种以及这个两个变种的杂合体

3、(hybrid)，而新生变种和格鲁比变种在流行病学和临床致病过程并不完全相同。1表型分型根据新型隐球菌细胞外荚膜多糖的抗原性差异。将新型隐球菌分为A、B、C、D和AD。’。血清型A、D和AD在世界范围内广泛分布，主要从鸟粪中分离．亦可从树木、土壤和家禽猫或牛中分离。其中血清型A为新型隐球菌格鲁比变种，血清型D为新型隐球菌新生变种，而AD则为格鲁比变种和新生变种的杂合体。A、D和AD血清型的新型隐球菌感染免疫缺陷人群(尤其是艾滋病患者)。血清D型较少引起隐球菌病，并且其中一些病例是由AD杂合体引起的。血清D型虽呈世界分布。但更多见的从欧洲分离的∞

4、3。而血清型B、C为新型隐球菌格特变种，局限于热带和亚热带地区的澳大利亚、亚洲、南非、加利福尼亚南部和欧洲南部，但自1999年以来在加拿大英属哥伦比亚的Vancouver岛出现格特变种的爆发流行∽3。2分子分型为8个新型隐球菌分基因型(VNI，VNlI，VNIII，VNIV，VGI，VGIl，VGIII，VGIV)，其与血清型的对应关系见表l“”。表I新型隐球菌的基因分型2．1PCR指纹技术(PCR—fingerprinting)微卫星DNA又称为简单重复序列(simplesequencere-peatsSSR)，或者短串连重复序列(short

5、tandemre-peatsSTRS)，具有高度的多态性，广泛分布在人类、低等原核生物和真菌基因组中⋯’。PCR指纹技术是以微卫星(microsatellite)M13(57一GAGGGTG—GCGGTTCT一3’)或者小卫星(minisatellite)的(GA—CA)4和(GTG)5的重复序列为单一引物做PCR。21。早在】993年，MeyerW等人¨33就应用PCR指纹技术对酵母菌进行种和株的鉴定。应用该方法将新型隐球菌分为了8个基因型’1“。通讯作者：卢金星．Email：lujinxing@icdc．cn作者单位：中国疾病预防控制中心传

6、染病预防控制所，北京102206万方数据868中国人兽共患病学报ChineseJournalofZoonoses2010，26(9)VivianiMA“们等人利用(GACA)。为引物，对73株新型隐球菌和8株其它酵母菌进行PCR指纹分型研究，成功的将隐球菌与其它酵母菌区分开，并且区分出了隐球菌的5个血清型。该实验研究发现PCR指纹技术在区分血清型A、D和AD时比血清学方法稳定，并且也能够区分AD株。MeyerW“"研究组在1999年时对世界多国的共356株隐球菌进行分型。将分离株分为4个基因型，其中78％的分离株为VNI基因型，18％为VNII

7、，1％VNIII和3％的VNIV。2003年该工作小组为了解伊比利亚美洲地区的隐球菌分型和流行特点，也应用PCR指纹技术检测临床、动物和环境的340株分离株¨∞。结果68．2％为VNI基因型，即血清A型的格鲁比变种，这与该种是引起全球隐球菌感染主要菌株相一致。2008年，陈江汉等⋯检测中国16个省，1980—2006年收集的120株标本，应用PCR指纹技术将129株隐球菌分为相应的8个基因型。2．2限制性片段长度多态性分型技术(RestrictionFragmentLengthPolymorphismRFLP)RFLP既能从遗传学水平上区分不同

8、个体，又可揭示不同个体间的遗传关系，从而应用于物种间的关系研究，和遗传指纹和亲子鉴定。VelegrakiA等人“∞对临床分离的隐球菌株PCR扩增其UR