序列比对及建树步骤

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1、序列比对及建树步骤1.以细菌、病毒或寄生虫为例，参考分类生物学资料，从GenBank中查询相关序列，详述Blast寻找、CLUSTAL比对、建树及种系发育过程以隐孢子虫actin基因为例做一叙述：1.1Blast:登录NCBI主页，打开Blast搜索引擎，将测得的一个已知的actin序列输入，下载了12条隐孢子虫序列，另外下载一条恶性疟原虫actin序列作为外群。所获得的14条序列改为FAST格式，用TXT文件保存。1.2cluxtal比对用软件clustalx1.83比对软件进行比对。71.3比对的精制对比对结果可以进行一些简单的调整，删去目的序列比对效果最差的开头和结尾部分。可以用wor

2、d文档打开比对所生成的aln.文件，在word文档下进行剪切。然后将剪切的文档再用ClustalX软件进行比对，并生成Phylip格式文件。71.4使用Phylip软件建树以neighbour-jioning方法为例做一叙述。1.4.1先导树将生成的PHY文件（*.phy）拷贝到Phylip软件包目录下，最好修改成比较简单的文件名，比如修改成1或a等（比较方便下边的输入运行）。运行DNADIST.EXE子软件，输入文件(比如1)，打回车后弹出软件界面，打D可以选择不同的模型，在此选用Kimura2-parameter模型。生成的outfile文件可以再修改成简单的文件名，比如修改成2。打开n

3、eighbor.exe子程序，输入文件2，打回车后运行完毕会生成两个文件，将文件outtree另存为.tre文件格式，即为所生成的先导树。71.4.2验证树1.4.2.1打开seqboot.exe输入文件名：输入你用CLASTALX生成的PHY文件（*.phy）。R为bootstrap的次数，一般为1000（设你输入的值为M，即下两步DNADIST.EXE、NEIGHBOR.EXE中的M值也为1000）。oddnumber:(4N+1)(eg:1、5、9…)修改好了打回车y得到outfile（在phylip文件夹内）改名为21.4.2.2打开Dnadist.EXE7输入2修改M值，再按D，然

4、后输入1000（M值）打回车y得到outfile（在phylip文件夹内）改名为31.4.2.3打开Neighboor.EXE输入3M=1000（M值）打回车Y得到outfile和outtree（在phylip文件夹内），改outtree为4，outfile删除或另存1.4.2.4打开consense.exe输入4打回车y得到outfile和outtree（在phylip文件夹内），Outfile可以改为*.txt文件，用记事本打开阅读或删除。而outtree文件即为我们所需要的验证树。1.5结果输出在获得树文件后，常用Treeview软件打开，并可以用此软件对其进行修饰。777