UPLC_MSMS和HPLC_MSMS操作规程

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1、ABSCIEXTRIPLEQUADTM5500的PPG质量准确度校准操作规程一、前期准备1、PPG稀释溶液的准备，对于5500系列采用的标准溶液：正离子模式：POSPPG2E-7M；负离子模式：NEGPPG3E-5M2、离子源的垂直旋钮调至“5”位。3、用质谱仪上的针泵式进样针吸取适量的PPG校准液，检查管路是否连接好。二、操作步骤1、双击“HardwareConfiguration”，激活“MSOnly”。2、菜单栏切换到“Installation”项目。3、双击“ManualTurning”

2、，打开手动调谐界面。4、点击“OpenFile”，选择相对应的采样方法（Q1PosPPGs.dam；Q3PosPPGs.dam；Q1NegPPGs.dam；Q3NegPPGs.dam），先正离子再负离子，先Q1调谐再Q3调谐，扫描速率依次为10、200、1000、2000Da/s，对应MCA分别为10、50、50、100。5、点击“StartSyringePump”，再点击“Start”开始采集数据。6、将会在界面上出现采集到的质谱图，右键点击右侧质谱图区域，选择“OpenDate”。7、点击工

3、具栏中的“CalibrationFromSpectrum”。8、在弹出的菜单中选择合适的校验标准，在“Standard”中选择对应的校准溶液，点击“Start”开始校准前的计算。9、第一个图形代表的是此次校准与理论值的质量偏差，各点应位于“±0.1Da”线内。若某质量点超出了设定的范围，则应点击“UpdateMassCalibration”，更新那些偏离的质量点的电场参数，使之落到“±0.1Da”线内。10、第二个图形代表的是PPG校准峰的半峰高宽度，各点应位于“0.6~0.8”范围内。若某点质

4、谱峰半峰宽超出标准范围，点击界面上的“Advanced”按钮，调节对应的“Offset”电压，使之合规。质谱分辨率质谱半峰宽（FHWM）Offset值增加提高减小Offset值降低降低增加11、第三个图形代表的是此次校准与上次校准所有PPG校准点峰强度变化的百分比。14、待校准完成后，点击“Stop”停止进样，并灭活“MassOnly”。三、结束工作针泵吸取50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，2~3次即可。标准品质谱条件调谐（TuneandCalibrate）操作规程一、前期准备1、检查离子源是否

5、干净，将垂直旋钮跳到“5”位。2、用50%甲醇水溶液（乙腈水溶液也可）配置20~50ng/mL的标准溶液（根据响应值调节浓度，将目标化合物母离子与周围离子响应值相差明显即可）。√正离子化合物，可添加0.1%甲酸√负离子化合物，无需添加一、操作步骤1、创建project：打开Analyst软件，在菜单栏中打开“Tools”，选择“project”下的“CreateProject”，输入“Projectname”即可。2、双击“HardwareConfiguration”，激活“MSOnly”，双击

6、“ManualTuning”，打开调谐界面。3、Q1Scan：在当前界面设置扫描模式为“Q1MS（Q1）”，将扫描范围设为100~MW+30，扫描速率为200Da/s，Duration为5min，先点击“StartSyringePump”，再点击“Start”，找到目标化合物母离子。待扫描完成后，选择“Center/Width”，将目标母离子的m/z输入“Center（Da）”中，“Width（Da）”设置为3，“Scanrate”设置为10Da/s，选上“MCA”，“Cycles”设置为20~

7、50，点击“Acquire”采集数据并保存。4、ProductionScan：扫描模式为“ProductIon（MS2）”，在“Productof”中输入母离子的m/z，将CE值修改为5eV，扫描范围为100~MW+30，扫描速率约200Da/s，Duration为5min，点击“Start”开始扫描，以5eV为步长手动调节CE，找到合适的子离子（母离子的强度为基峰强度的1/3到1/4为宜），点击“Stop”。选上“MCA”，“Cycles”设置为20~50，点击“Acquire”采集数据并保存

8、二级质谱图（若要获得柱状图需在AdvancedMS中选择Centroid）。3、优化化合物参数：根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对，输入右侧框中，每对离子对建议分析时间为100ms（若化合物比较多减小时间），并输入ID。点击“EditRamp...”，先后选择CE和DP，点击“Start”进行优化，将优化好的CE和DP值添加到表格中。4、保存质谱方法，灭活“MSOnly”。三、结束工作针泵吸取50%甲醇水溶液，对管路进行冲洗，2~3次即可。ACQUITYUPLC串联质谱（UPLC-MS/