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1、沈阳大学学报自然科学版,几〕!∀#∃%&&∋(!)∗+∋习∗,(−&之一,‘&万‘韶,,.己/‘&之0“,,谈五1223年第4期生化检验技术在昆虫分类上的应用王丽荣王淑珍5摘要本文从理论和实践的结合尤论述了生化检验技术在昆虫分类上应用的方法即运用。琼脂免66疫电泳法区别鳞翅口幼虫近似种聚丙烯酸胺凝胶电泳测同功酶染色体分析法关键词生化检验技术昆虫分类近二十年来,,昆虫分类方法除传统经典的形态学外,又出现了新的由于科学技术的发展内。5。,容如&7电子显微镜和电子扫描显微镜的应用它通过对昆虫的某些器官超微结
2、构的观察来鉴定、区别昆虫的近似种及种以下白8分类。47数值分类。它动用电子计算机把昆虫分类这门,科学引进了数学统计学的领域。37生化分沂法。’官研究昆虫衍化过程中的细胞水平的生化特,并,。征差异与对应的形态学特征有机结合因此给经典的形态分类学提出可靠的理论依据生,趋。,。化分类法目前在国内尚属新兴于广泛应用尤其近十年来取得了一定的成果与经典的形态学相,,,‘∋7。比其资料成果虽较贫清但前景远大不容低估我们知道,自然界中一切生物都有遗传和变、异的双重特性。一个昆虫种的形成过程也非常,。因,复杂很多种类或群体是处
3、在生物进化分支的不同阶段此我们想用单一的形态学特征去,,,。了解它们把它们作严格分类在分类学发展的今天己成难事实践中很多实例能充分说明这。5。∋一点例如多同胞种9近缘种7中的分类过去认为双斑角蝉&.恤:;<−=>:;?−?−9%−≅7原定是,8由一个同地不同寄主宗组成的一个多食种后经萧定环教授伟,‘美国7运用杂交交配选择同功、,。用‘,,酶分析染色体分析等新法鉴定认为它是一群六个种的混合体同样方法还确定了马齿Α0;ΑΑΧ。−。;Α;Χ&5Ε“”,。觅叶蜂9%Β>&&Δ&17的两个生物型是出现在同一地区的两个种
4、两种之∗司有严格的生殖隔离。从而可以说明,生化检验技术在昆虫分类鉴定中是有一定重要作用的。目,、。,前国内外设计采用的生化法分类技术种类很多在此仅根据实践及学习体会介绍几项如下。。1动用琼脂免疫电泳法区别鳞翅目幼虫的近似种南京农业大学钟党民教授用来鉴定玉米螟和‘”。烟青虫的近似种获得成功181实验原理5,用供试昆虫亚洲玉米螟#/?Χ>:>−ΦΓΗ−.−&>/9)∀&Α此Α7的幼虫血蛋白作为抗原注入饲养家免体内,。,产制取兔免疫血清抗体根据一种抗体只与相应抗原发生作用生抗原抗体凝——沈阳大学学报自然科学版422
5、3年第4期4Ι,。5,聚的特征性反应经电泳制出沉淀弧分析不同沉淀弧的特征即可表明亲缘关系越近沉淀物越多,沉淀弧。的图形也越近似184试剂配制。,,。,、福氏佐剂9∃ΧΑΓ:ϑ>/−Α&>−Χ−5∗?7由羊毛脂石腊油卡介苗配成按不同比例配制分成9&79。47号。88。。净化的普通琼脂<Κ%Λ6Μ;Ν3Η的巴比妥缓冲液氨基黑染色液等183实验步骤与方法588。8131‘,74。,制取兔抗虫免疫血清取ΜΜΜ2以上重量健康雄兔在双脚部清洁消毒注入Μ/Η&佐剂9&7号。十天后在膨大的腹股沟淋巴结部经同样处理,注入佐剂9
6、47号及昆虫血淋巴,按1,88,。5&混合共。4Η&3Μ天后采取家兔抗体血清置冰箱保存备用88134将诸抗原分别作电泳处理。把电泳后的的琼脂平板横槽中加满兔抗虫血清。然后于湿盆。。14天,1中进行双面扩散4Ο小时后即可出现沉淀弧用生理盐水浸泡一清水冲洗一4次后置33℃温箱内干燥。,37将干燥的琼脂平板放入氨基黑&;Π染料中Ι一1Μ分钟染色然后用ΙΘ醋酸漂洗使沉淀弧呈兰色。最后比较沉淀弧的形状、沉淀的多少,确定它们之间的亲缘关系。4聚丙烯酞胺凝胶电泳测同功酶。8415实验原理同功酶是指酶分子的一级结构、理化性质
7、、生理功能不同,而催化作用相同的多种形式的酶类。如组织中的乳酸脱氢酶和醋酶的同功酶8仅以乳酸脱氢酶和酩酶的同功酶。仅以乳酸888、、,,、,,,,8,,,、,、,8Σ,8,Ρ、ΣΣ,,、一Σ,‘ΣΡ、Τ,一Σ一ΣΣΣΣΣΣΣΡΣ5;ΚΡ一一Σ。Ρ氧化。ΣΣΣ还二原导脱氢酶∀。同功酶为例∀是参与糖酵解的酶能催化乳酸二羊丙酮酸又能使丙酮酸竺乳‘,。酸从而完成葡萄糖的无氧分解过程∀Υ刊是由分子量为3ΕΜΜΜ的多肤。亚基和日亚基组成。、。的四聚体由于。月亚基的不同而组成五种∀ΥΚ的同功酶−−−−七、−−−−−ς日Δ归
8、日ς日日日ς归ΔςΔς∗5∀ΥΚ3ΥΚ6Ε9∀ΥΚ∗∀ΥΚς比∗∀Υ于1由于同功酶分子结构的差异、分子大小、形状等都不相同,导致在一定<Κ缓冲液中所携带的电荷也不同。如果将其电泳,由于迁移率不同,各组分离,从负极到正极分成五带,界限清楚。如下图所示。8日Χ18⋯一一⋯‘二‘纂8⋯‘8,撇8,8,Ω、一二⋯?8‘霎晋∀Μ日歹∀∀。也∀。‘∀Υ日叽图&电泳凝胶板示意图,、如测试的样本是若干种则应得出若干
