免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定大米中桔霉素

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1、免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定大米中桔霉素樊祥１，!庆华１，伊雄海１，李广寅２，赵善贞１，阮寅１，谌鸿超１（１．上海出入境检验检疫局食品中心，上海２００１３５；２．上海海洋大学食品学院，上海２０００９０）摘要：大米样品经甲醇１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１磷酸溶液（７０＋３０）提取，提取液稀释过滤后经ＣｉｔｒｉＴＭ免疫亲和柱层析净化后用高效液相色谱法测定其桔霉素的含量。以Ｋｒｏｍａｓｉｌ１００１０Ｃ色Ｔｅｓｔ１８谱柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５）为分离柱，甲酸（１＋９９）溶液与乙腈以体积比１比１混合的溶液作μｍ流动相，采用荧

2、光检测，激发波长为３５０ｎｍ，发射波长为５００ｎｍ。必要时采用液相色谱串联质谱法对结果作验证。桔霉素的质量浓度在５．０～５００．０·Ｌ－１范围内与其峰面积呈线性关系，测定μｇ下限（１０犛／犖）为１０．０·ｋｇ－１。方法的回收率为７３％～７６％，相对标准偏差（狀＝８）为７．５％～μｇ１１．８％。关键词：高效液相色谱法；免疫亲和层析净化；桔霉素；大米中图分类号：Ｏ６５２．６３文献标志码：Ａ文章编号：１００１４０２０（２０１０）０８０８７２０４犎犘犔犆犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犆犻狋狉犻狀犻狀犻狀犚犻犮犲狑犻狋犺犘狌

3、狉犻犳犻犮犪狋犻狅狀犫狔犐犿犿狌狀狅犪犳犻狀犻狋狔犆犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔１，犆犎犝犙犻狀犵犺狌犪１，犢犐犡犻狅狀犵犺犪犻１，犔犐犌犪狀犵狔犻狀２，犉犃犖犡犻犪狀犵１，犚犝犃犖犢犻狀１，犆犎犈犖犎狅狀犵犮犺犪狅１犣犎犃犗犛犺犪狀狕犺犲狀（１．犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犉狅狅犱，犛犺犪狀犵犺犪犻犈狓犻狋犈狀狋狉狔犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀犪狀犱犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲犅狌狉犲犪狌，犛犺犪狀犵犺犪犻２００１３５，犆犺犻狀犪；２．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犉狅狅犱犛犮犻犲狀犮犲，犛犺犪狀犵犺犪犻犗犮犲犪狀犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犛犺犪

4、狀犵犺犪犻２０００９０，犆犺犻狀犪）犃犫狊狋狉犪犮狋：－１Ｃｉｔｒｉｎｉｎｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｒｉｃｅｓａｍｐｌｅｗｉｔｈａｍｉｘｔｕｒｅｏｆｍｅｔｈａｎｏｌａｎｄ１０ｍｍｏｌ·Ｌｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄ（７０＋３０），ａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｏｂｔａｉｎｅｄｗａｓｄｉｌｕｔｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｐａｓｓｉｎｇｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｉｍｍｏｕｍｏａｆｆｉｎｉｔｙＴＭｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｌｕｍｎＣｉｔｒｉＴｅｓｔｃｏｌｕｍｎ．ＩｎｔｈｅＨＰＬＣａｎａｌｙｓｉｓ，Ｋｒｏｍａｓｉｌ１００１

5、０Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）ｗａｓｕｓｅｄａｓｓｅｐａｒａｔｉｏｎｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄａｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆｄｉｌ．ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄ（１＋９９）ａｎｄａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｍｉｘｅｄｉｎｔｈｅｒａｔｉｏｏｆ１ｔｏ１ｂｙｖｏｌｕｍｅｗａｓｕｓｅｄａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｔｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｓｏｆ（λｅｘ）３５０ｎｍａｎｄ（λｅｍ）５００ｎｍｗａｓａｄｏｐｔｅｄｉｎｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｉｆｎｅ

6、ｃｅｓｓａｒｙｂｙｈｙｐｈｅｎａｔｉｏｎｏｆＬＣＭＳ／ＭＳ．Ｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｖａｌｕｅｓｏｆｐｅａｋａｒｅａａｎｄｍａｓｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｃｉｔｒｉｎｉｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｆｒｏｍ５．０ｔｏ５００．０μｇ·Ｌ－１，ｗｉｔｈｌｏｗｅｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｌｉｍｉｔ（１０犛／犖）ｏｆ１０．０μｇ·ｋｇ－１．ＶａｌｕｅｓｏｆｒｅｃｏｖｅｒｙａｎｄＲＳＤ′ｓ（狀＝８）ｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ７３％－７６％ａｎｄ７

7、．５％－１１．８％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．犓犲狔狑狅狉犱狊：ＨＰＬＣ；Ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｃｉｔｒｉｎｉｎ；Ｒｉｃｅ黄变米是由于稻谷在收割后和储存过程中含水米不但失去食用价值，而且含有岛青霉毒素、黄绿青量过高，被真菌污染后发生霉变所形成的。由于霉霉毒素、桔霉素和皱褶青霉素等许多种毒素。其中，变米呈黄色，故也称为“黄粒米”、或“沤黄米”。黄变最常分离的霉菌有黄绿青霉毒素、岛青霉毒素和桔霉素等。桔霉素是在１９３１年从桔青霉中首次获得收稿日期：２００９０６１

8、８的，是青霉、曲霉和红曲霉等丝状霉菌代谢产生的一作者简介：樊祥（１９７９－），男，辽宁营口人，工程师，硕士，从事种真菌毒素。桔霉素纯品为黄色、无味的晶体，熔点食品分析研究。为１７０～１７３℃，微溶于水，易溶于丙酮、乙腈等有机·８７２·樊祥等：免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定大米中桔霉素溶剂，其分子式