淀粉中还原糖的测定

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1、还原糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法班级：生科2班姓名：胡雨雨同组人：张贤明实验目的1.掌握还原糖和总糖测定的基本原理。2.学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。实验原理还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。在碱性条件下，还原糖与3，5一二硝基水杨酸共热，3，5一二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并

2、计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。仪器、试剂、材料仪器：（1）试管X11（2）玻璃漏斗X2（3）烧杯：1OOmlX1（4）三角瓶：100m1X1（5）容量瓶：100mlX3（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计试剂：（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取10mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到10ml的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。（2）3，5-二硝基水杨酸试剂：将0.315g3,5-硝基水杨酸和13.1ml2mol/NaOH溶液，加到25ml含有9.25g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加0.25

3、g结晶酚和0.25g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至50ml，贮于棕色瓶中备用。材料：食用面粉。注意事项1.沸水浴时应将试管口用保鲜膜封住，以防止水分蒸发引起体积误差。2.应该待反应体系稳定后进行比色（约10min）。3.比色时，比色皿中盛放的溶液体积不应过多，一般在2/3~3/4。4.比色时不能将溶液溅在仪器面板和仪器内。5.标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。6.实验完成后洗净仪器，放回原位。实验步骤1.标准曲线的绘制管号1mg/ml葡萄糖标准液(ml)蒸馏水(ml)DNS(ml)葡萄糖含量（mg)光密度值0021.5010.21.81.50.220.41.61

4、.50.430.61.41.50.640.81.21.50.851.01.01.51.061.20.81.51.2实验步骤按照上表取7支试管配好试剂，将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即冷却至室温，再以蒸馏水定容至25ml，混匀。在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1-6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线。实验步骤得出吸光值管号1mg/ml葡萄糖标准液(ml)蒸馏水(ml)DNS(ml)葡萄糖含量（mg)光密度值0021.50010.21.81.50.20.05220.41.61.50.40.19630.61.41.50.60.29340.81.

5、21.50.80.44151.01.01.51.00.54961.20.81.51.20.668实验步骤以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲线实验步骤2. 样品中还原糖和总糖含量的测定样品中还原糖的提取：准确称取3.0g食用面粉，放在50ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加25ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。离心，用2Oml蒸馏水洗残渣，再过滤，将两次的滤液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。实验步骤3）显色和比色，取2支25ml刻度试管，编号，按下表所示的量操作。管号还原糖待测液（ml)蒸馏水（m

6、l)DNS(ml)光密度值查曲线葡萄糖含量(mg)样品10.51.51.50.1120.27样品20.51.51.50.1210.28根据函数y=0.595x-0.046可得葡萄糖含量样品光密度平均值=(0.112+0.121)/2=0.1165实验结果及数据处理已知提取液总体积为100ml、测定时取用体积为0.5ml、样品毫克数为3000mg、根据以下公式进行计算。样品平均葡萄糖=0.27+0.28=0.275mg还原糖%=（0.275*100*100%）/（0.5*3000）=18.3%其他方法糖含量定量测定的方法除此之外还有①高效液相色谱法（HPLC）②苯酚-硫酸法③蒽酮法④双折射现象心

7、得从结果中所得到的的心得并不是所有的糖有甜的味道，只有少数结构简单的糖是有甜味的，如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖等，充斥于各种甜食之中的就是它们。自然界存在的多数糖——多糖，吃起来并不甜，各种粮食都是含糖大户，主要是淀粉和糊精。粮食不仅可以提供能量，而且还是B族维生素、膳食纤维、矿物质的重要来源，因此人们的生活中的确不能没有它。当我们食用面食时，虽然食用的是主食，但事实上其中的一半都是糖分所以