氯霉素分子印迹聚合物固相微萃取

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1、氯霉素分子印迹聚合物整体柱的制备及其固相微萃取应用研究主要内容实验内容结果与讨论3研究背景12研究背景氯霉素（CAP）是一种广谱抗生素，因其具有抗菌性强、药性稳定、价格低廉等优点而被广泛用于畜牧和水产养殖业。但CAP又有抑制人体骨髓造血功能而导致严重的毒副作用，故动物性食品和水产品中的CAP残留对人类健康构成极大的威胁。欧盟和美国均在食品法规中规定CAP的残留限量标准为“零容许量”，随着食品安全越来越受到世界各国及相关国际组织的日益关注，对动物性食品中氯霉素的检测技术也提出了更高的要求。由于兽药残留分析属复杂基质中痕量组分的分析技术，待测物质浓度低，样品基质复杂

2、，干扰物质多,所以需要对样品进行分离纯化和富集。整体柱(monolithcolumn)是1989年首次提出的，其制备简单、性能稳定，具有比表面积大、通透性好、传质速度快的优点。将整体柱应用于样品预处理，可以提高萃取容量和萃取效率，缩短萃取时间；也可应用于水溶液样品的提取，生物兼容性好。分子印迹技术选择性高，去除基质干扰效果好，是残留分析研究领域的一个新的发展方向。鉴于分子印迹技术的高选择性和整体材料的诸多优点，二者结合起来是一个必然的发展趋势，即分子印迹聚合物整体柱技术。本文以CAP为模板分子，通过对分子印迹聚合物整体柱合成条件的优化，首次在小移液枪枪头里获得了

3、对CAP有选择性提取的分子印迹聚合物整体微柱。并将该整体柱应用于食品中CAP的分离富集，建立了牛奶中CAP的分析方法，具有选择性高、富集倍数和回收率高的优点。整体柱所谓整体柱,又称为棒状柱、连续床层、无塞柱，是一种用有机或无机聚合方法由单体、引发剂、致孔剂等混合物在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相。这种色谱柱制备方法简单,由于使用了聚合方法可以往固定相中引入各种可能的作用基团，有十分多变的灵活性，同时用原位聚合制得的整体色谱柱要比常规装填的色谱柱具有更好的多孔性和渗透性，具有灌注色谱的特点，即色谱柱中既有流动相的流通孔又有便于溶质进行传质的中孔（几十个纳米）。

4、因而可以对生物大分子进行快速分离，而且色谱柱的稳定性很好。原位聚合法原位聚合法(insitupolymerization)是一种将模板分子、功能单体、交联剂、引发剂、溶剂按照一定比例混合，然后放在特定的容器(如液相色谱柱、毛细管柱等)中直接聚合。由于该法得到的聚合物，不需要研磨、过筛、沉降等繁琐的处理步骤可以直接用于分析，所以得到了很快的发展。原位聚合法还可以与一些其他的技术如膜、整体柱等技术相结合，制备分子印迹膜(MIM)、分子印迹整体柱等。实验内容2.1实验材料：氯霉素(CAP，99.4%)甲砜霉素(TAP，99%)，甲硝唑(MNZ)乙二醇二甲基丙烯酸酯(E

5、GDMA，使用前用NaOH溶液萃取，再用超纯水洗后用无水MgS04干燥）偶氮二异丁腈(AIBN，使用前用无水乙醇重结晶)4-乙烯基吡啶(4-VP，95%)丙烯酰胺(AM)，甲基丙烯酸(MAA)，丙烯酸(AA)分析纯甲苯、十二醇、色谱纯甲醇、乙腈等。Dionexultimate3000HPLC仪(美国Dionex公司)兰格LSP01-1A型注射泵(保定兰格恒流泵有限公司)移液枪枪头(4*49，200μL)2.2CAP-MIP整体柱的制备0.5mmol氯霉素0.2950g十二醇46μL甲苯0.1mmol4-VP1mmolEGDMA8.5gAIBN混匀超声4h混匀超声

6、10min用100μL进样针移取50μL与用甲醇处理过的一端封口的移液枪枪头内，枪头用保鲜膜及硅胶封口于60℃反应24h除去保鲜膜及硅胶，剪开末端封口，用甲醇将模板分子洗净后备用。非印迹聚合物整体柱的制备：除不加模板分子外，其余步骤同上。2.3CAP-MIP整体柱吸附性考察1mL5μg／mLCAP、TAP和MNZ的混合水溶液，以0.2mL／min过整体柱后，用100μL甲醇洗脱，收集洗脱液直接进行HPLC分析，以考察选择吸附性。分别将一定浓度的CAP(10μg／mL)、TAP(5μg／mL)和MNZ(5μg／mL)的水溶液以0．05mL／min过整体柱，直到流出

7、液的峰面积与上样水溶液的峰面积相等，记录每种物质总的上样体积和流出液的相应浓度及体积，以考察吸附容量。2.4条件优化2.5分子印迹聚合物整体柱固相微萃取过程将MIP整体柱与医用注射器组装起来，见图2-1(b)(c)，取4mL溶液，以0.2mL/min上样后，用500此水以0.2mL/min清洗，再用100μL甲醇以0.1mL/min洗脱，洗脱液直接进行HPLC分析。微萃取过程见图2-1(d)。合成MIP的条件优化考察SPME-HPLC分析方法的色谱条件（a）（b）（c）（d）图2-1分子印迹聚合物整体柱固相微萃取装置及过程(a)分子印迹聚合物整体柱，(b)、(c

8、)MIP整体柱与医用注射