大肠杆菌高密度发酵研究

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1、万方数据动物科学与动物医学2001年1月第18卷第1期(总第73期)个体很大，仍有部分难产现象。产羔61只，其中活羔59只，产羔率96．82％，活羔占96．72％。羔羊平均出生重4．36kg。囊2量矗捧■检旺牯暴麓计寰供体羊编号ABc未受精合计1451823讨论与分析本次研究超排供体波尔山羊获卵枝数，胚胎可用率及其移植成功率，均达到目前国内较好水平，具有根大推广应用价值。每只受体母羊移植一枚胚胎，是出于准备受体羊较多和考虑到以后若因事故流产只损失一枚胚胎。在以后推广应用过程中应根据羊的繁殖生理性能适当增加移植胚胎枚数。供体渡尔山羊在冲胚后经使用PG

2、催情，均艋续发情配种．未影响其正常繁殖。为了使波尔山羊迅速繁殖扩群，可考虑每年2次超排移植。在受体羊选择过程中，虽经挑选，但由于羔羊出生重过大，难产现象很多．建议各地在开展胚胎移植和杂交改良过程中对受体或母本品种和个体应慎重考虑。(收稿日期：2000_11·30)大肠杆菌高密度发酵研究刘文波，柴同杰(山东农生大学动物科技学院-山东泰安271018)■耍。南奢度妻肆王曩代发酵工程砖一项斯技术，能王著捉高大■轩■■体和基罔工程产品的产量a袁由就彤响太■轩t高窘度炭肆的因素置其控制、发酵方式的遗择和发酵蚌点爿新曩弄常炭肆处理进行了^要甘论，井对太■杆■的

3、高窘度发酵进行了晨望．美■■：太_杆曹}高窘度发酵。瘩氧裹度中■分粪号lTq920．1文■标识码zB立章■号；l008—9381(2001)01～0027一03致病性大肠杆菌是畜禽最常见的病原菌之一。可1膏密度发酵的影响因囊和控■引起膏禽的严重腹泻、家禽的败血症及卵黄性腹膜炎1．1培养基等一系列疾病，是影响膏膏业的一个重要因素。对该高密度发酵的生物量达150～200g／L，为满足病多以疫苗预防为主，效果也较好。但目前大肠杆菌细菌快速生长及大量表达基因产物的需要，常需投入的生产多用普通琼脂或营养内汤进行培养，抗原产量2～5倍于生物量的基质，加上利用率

4、，实际量远高于低且生产成本高，难以大批量生产。而用一般发酵工此值。大肠杆菌高密度发酵使用的培养基多为半合成艺生产，发酵液中的菌体浓度仍较低。难以获得理想培养基，其备组分的浓度和比例对发酵影响很大。如效果。近几年，人们又对高密度发酵进行了研究并取硪源和氮源比例偏小，会导致菌体生长旺盛，造成菌得了较大进展。实现高密度、高产率和高浓度培养是体提前衰老白溶；而其比饲偏大·则苗体繁殖数量少，当前爱酵工业的目标和方向01。对于大肠杆菌。尤其细菌代谢不平衡，不利于产物积累。由于优化碳源是是重组大肠杆菌，实现高密度发酵不仅可相应减少反大肠杆菌发酵的关键因素，人们就

5、碳源对高密度发酵应物体积，降低生物量的分离费用，还可缩短生产周的影响做了大量研究。葡萄糖是目前最常用的碳源物期、减少设备投资，从而达到降低成本、提高生产效率质。通过对重组大肠杆菌生产谷胱甘肽(GsH)发酵的目的。条件的研究表明：初糖浓度为10g／L时，重组大肠杆。u9o"o他¨n，"坫2∞ml352572753n516”453∞27佰。：o。oo，oo"n堙”¨洲万方数据28Animalscience＆VeterinaryMedici耻V01．18No．1(Total№．73)菌wsH—KE发酵24h，细胞干重达最大，细胞内GsH含量也高于其它糖浓

6、度o]。对高密度发酵大肠杆菌生产重组人骨形成蛋白一2A的研究也表明：基质中初糖浓度为10g／L时细胞浓度和产物表达量均获得了较好的效果”]。上述研究表明：当培养基中糖初始浓度为10g／L时，可获得理想的发酵效果。如果培养基中糖浓度过高，超过菌体生长需要量，则会导致乙酸生成。糖浓度超过50g／L时大肠杆菌的生长将受到抑制⋯。以甘油代替葡萄糖作为碳源则可减少代谢剐产物——乙酸的积累，而且更易达到重组苗的高密度和外源蛋白的表达[5]。除碳源外．培养基中的氮源、微量元素和各种无机盐含量对大肠杆菌发酵也有较大影响。一般而言，大肠杆菌培养时营养的抑制浓度为：葡

7、萄糖(50g／L)、氟(3g／L)、Fe2+(1．15g／L)、M92+(8．7g／L)、Po。3。(10g／L)、Zn2+(o．038g／L)Ⅲ。此外，致病性大肠杆菌和基因工程大肠杆菌发酵所需营养条件也不完全一样。1．2接种量接种量是指移人的种子液和培养液体积的比例。它的大小决定了菌种在发酵罐中的生长速度。采用大接种量．由于种子液中台有大量体外水懈酶类，有利于对基质的利用，缩短生长延迟期，并使生产菌迅速占领整个培养环境。但过高的接种量也会使菌体生长过快，消耗大量营养物质，反而影响后期的生长。在一定范围内增加接种量有利于菌体的生长(1％、z％、5％

8、接种量分另Ⅱ为10％的95．4％、96．6％和98％)[6]。因此，接种时应根据实际情况确定接种量。一般多采用4％～5％。