松花粉对慢性应激大鼠肠道微生态的影响

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1、松花粉对慢性应激大鼠肠道微生态的影响白树民1高爱新2雷浪伟1李培荣1李红毅1郑珍2杨小明2(1中国航天员科研训练中心，北京，1000942中国林科院松花粉研究开发中心，浙江，杭州，311400)摘要目的观察慢性应激对大鼠肠道微生态的影响及松花粉的保健作用。方法采用大鼠慢性应激动物模型，3种刺激因素嗓声、强迫游泳和头低位束缚随机作用于大鼠，实验期7周左右。用选择性培养基平皿计数法检测大鼠粪便菌群中几种代表性菌种的数量；用酶联免疫法测定大鼠血清中应激激素的含量。结果慢性应激实验对照组大鼠，粪便中以益生菌双歧杆菌为主的原籍菌数量减少，而过路菌肠杆菌和肠球菌相应增多，即发生了肠道微生态紊

2、乱的现象；进食含5％松花粉饲料的实验组大鼠双歧杆菌数量减少不明显。结论在慢性应激条件下，大鼠发生了以原籍菌双歧杆菌减少为特征的肠道微生态紊乱的现象，食用松花粉能够有效减轻慢性应激因素导致的大鼠肠道微生态紊乱。关键词慢性应激；噪声；强迫游泳；头低位束缚；微生态；肠道菌群；双歧杆菌；松花粉中图分类号：文献标识码：A文章编号：本实验室曾对模拟失重条件下大鼠肠道菌群方面的变化进行过观察研究，发现在模拟失重条件下大鼠肠道菌群失调，表现为原籍菌中对机体有益的厌氧茵双歧杆菌数量下降，过路菌中需氧的条件致病菌大肠杆菌和肠球菌数量增加；在大鼠饲料中添加功能性低聚糖水苏糖可以改善模拟失重大鼠肠道菌群

3、失调【l】。然而，失重只是航天环境因素中的一个方面，噪声、狭小空间(束缚)、恐惧(束缚)和疲劳(体力上和心理上的)等因素也不可避免地会作用于航天员的身体，使航天员处于一种应激状态，导致神经内分泌的变化，从而造成全身各器官和系统的改变。这种变化应该也会对航天员肠道微生态平衡产生负面影响。俄罗斯(前苏联)研究人员发现，航天期间所有航天员都发生程度不同的肠道菌群失调，这种失调的特点为以厌氧菌为代表的“屏障"微生物种群数量降低，直至完全消失，在原籍菌的生境中出现过路菌及条件致病菌，这种变化即所谓的肠道微生态紊乱，能够对航天员的健康构成潜在威胁。研究表明，机体胃肠道微生态的平衡与稳定受多种

4、体内外因素的影响。航天特殊环境因素以及神经和情绪紧张，在航天员自身微菌群生态紊乱的形成与发展中具有重要作用。理论和实践都证实，保持机体肠道微生态平衡对维护航天员的健康和佳态是十分必要的12]。’’目前尚未见国内有关于在慢性应激条件下机体肠道微生态变化方面的报道。本研究拟利用复合因素大鼠慢性应激模型，观察大鼠以肠道微菌群改变为主的生理生化变化情况，探讨慢性应激条件对机体肠道微生态的影响及可能的机理。通过给大鼠饲料中添加松花粉类保健食品材料，观察其对慢性应激条件下机体的保健作用。为从膳食营养途径防护和改善慢性应激因素所致航天员的亚健康状态提供实验依据，开拓松花粉保健应用的新领域。方法

5、实验材料基础饲料：SPF级大、小鼠生长维持粉末饲料，北京科澳协力饲料有限公司生产。松花粉：中国林业科学院松花粉研究开发中心当年产破壁松花粉。水苏糖：西安德施普生物制品有限责任公司生产。．大鼠：SPF级清洁SD雄性大鼠，体重120±10克，由北京动物实验中心提供。大鼠实验分组及应激动物模型的建立108动物购回后适应性喂养3天后进行分组。根据动物体重将动物随机平均分为4组，每组10只：正常对照组(NormalControl，NC)，饲喂大鼠基础饲料；慢性应激对照组(ChronicStressControl，sc)，饲喂大鼠基础饲料；慢性应激松花粉组(ChronicStressPine

6、Pollen，PP)，饲喂在大鼠基础饲料中添加了5％亚林松花粉的饲料；慢性应激水苏糖组(Stachyose，ST)，饲喂在大鼠基础饲料中添加了1％水苏糖的饲料。所有大鼠均饮用纯净水，实验期间大鼠自由进食和饮水。慢性应激动物模型采用三种刺激因素建立慢性应激动物模型：头低位束缚束缚造模用采用自己研制的束缚筒。该筒由两部分组成，前部为铁皮制作的圆椎管形铁筒，长5cm，大口内径6cm，小口内径2cm，大口与一长25cm的布质袖套连接，袖套开口直径8～10cm，为大鼠的进入口，实物见图l。大鼠置入后，驱使其头部进入铁皮椎管内，然后紧贴鼠身体束紧布套，在尾部用别针别住，使其无活动空间。大鼠固

7、定后，将其头低位放置在坡度为15～20。的斜面上，时间为6h。强迫游泳大鼠在水深50cm，直径为80cm的水箱中游泳，水温控制在25℃士2℃左右，将大鼠尾部系1／5体重的负荷，记录游泳开始到衰竭(鼻子没入水中8秒钟为止)的时间。另外，大鼠进食量的多少会影响称重和游泳时间，在试验前禁食12h。噪声刺激噪声条件为1500Hz，92dB，每次1h，在本所噪声实验室中进行。动物分组后进食相应的饲料，一周后开始正式实验(目的是观察各组大鼠的初始状态是否有所不同)。每天随机选一种应激方式作用