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《番茄耐冷性RAPD分子标记的筛选及特异片段的克隆》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、新疆农业大学硕士学位论文番茄耐冷性RAPD分子标记的筛选及特异片段的克隆姓名：杨瑞申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：赵福宽;林成20040601新疆农业大学硕士学位论文摘要本论文以番茄LycopersiconesculentumMill.耐冷品系T9806和T9808冷敏感品系T9801及已构建好的耐冷性近等基因系T9801T9806(BC7)T9801T9808(BC7)为材料对其进行鉴定从近等基因系群体中选取高度耐冷个体及高度冷敏感个体各10株分别建立耐冷基因池和冷敏感基因池依据混合群体分组分析(BSA)和近等基因系(NILs)原理和方法进行RA
2、PD实验从520个10碱基随机引物中筛选出了三个在两池间及其建池单株中具有多态性的引物OPF-14OPD-11OPI-01用T9806T9808T9801及近等基因系群体单株DNA进一步验证证明了这三个引物扩增出的特异性片段OPF-14-800OPD-11-1200OPI-01-2000是三个与番茄耐冷基因连锁的RAPD标记以MAPMAKER软件计算出耐冷基因片段与OPF-14OPD-11OPI-01标记间的遗传距离分别为6.1cM9.8cM12.3cM选取其中遗传距离最小的多态性片段OPF-14进行克隆用树脂R-T-Easy法从琼脂糖凝胶中回收了OPF-
3、14扩增出的多态性片段与载体pGEM连接转入大肠杆菌DH5-通过蓝白斑筛选后提取重组质粒经PCR鉴定回收的片段与RAPD扩增所获得的差异性片段大小一致对克隆片段测序表明实际大小为792bp并将此片段序列在网上进行同源性比较发现该片段与番茄抗pto(细菌角斑病)基因同源本实验为转化成稳定的SCAR标记奠定了基础有助于进一步开展番茄耐冷育种的分子标记辅助选择的研究关键词番茄耐冷性RAPD分子标记克隆1番茄耐冷性RAPD分子标记的筛选及特异片段的克隆SelectionofRAPDMarkerandSpecificFragmentCloneforColdToler
4、anceinTomatoLycopersiconesculentumMill.YANGRui(VegetableBreeding)SurpervisedbyProf.ZHAOFu-Kuan,Prof.LINChengAbstractTomatonearisogeniclinesofcoldtolerancewereusedasexperimentmaterials,10eachofthecoldtolerantandcoldsensitiveplantswereselectedforDNAextractiontodeveloptolerantandsens
5、itivegenepoolsrespectively.BytheBSA,NILsandRAPDtechnique,520randomdecamerprimerswereusedtoamplifythetwotypesofgenepools,3polymorphicspecificfragmentsweredetectedandfoundfromthreeprimers(OPF-14OPD-11,OPI-01).Usingtheseprimerstoamplifytheparents,NILspopulations,thespecificfragmentsw
6、ereRAPDmarkerslinkedtocoldtoleranceoftomato.BythesoftwareMapmaker/3.0,theOPF-14,OPD-11,OPI-01markersweretestedtobelinkedtothecoldtolerancewithgeneticdistanceof6.1cM9.8cM,12.3cMrespectively.FragmentOPF-14-800wasextractedfromtheagaroseandmixedR-T-EasywithpGEMvector,thentransferredin
7、toDH5-.Throughwhite-bluecoloniesscreening,whitecloneswerepickedoutfromLB/Amp/X-gal/IPTGplate,thentherecombinedvectorwasextractedandamplifiedwithprimersSP6andT7.Finally,detectedbyelectrophoringinagarose,theresultsconfirmedthattheOPF-14-800hasbeenclonedsuccessfully.Theclonewasdeterm
8、ined792bpafterbeingsequenced.Onin
