Espin与whirlin相互作用机制的研究

《Espin与whirlin相互作用机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：Q5单位代码：10183研究生学号：2015344022密级：公开吉林大学硕士学位论文（专业学位）Espin与whirlin相互作用机制的研究Studyonthemechanismofinteractionbetweenespinandwhirlin作者姓名：王宇晨类别：工程学硕士领域（方向）：生物化学与分子生物学指导教师：邢述教授培养单位：吉林大学生命科学学院2018年月Espin与whirlin相互作用机制的研究Studyonthemechanismofinteractionbetweenespina

2、ndwhirlin作者姓名：王宇晨领域（方向）：生物化学与分子生物学指导教师：邢述教授类别：工程学硕士答辩日期：2018年月日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学博士(或硕士)学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，

3、本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI

4、系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。论文级别：■硕士□博士学科专业：生物工程论文题目：espin与whirlin相互作用机制的研究作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林省长春市吉林大学南校区生命科学学院130012作者联系电话：18003328547摘要Usher综合症会导致眼盲和耳聋，是视力和听力方面最常见的基因疾病。其中Ⅱ型（USH2）患者表现为先天性中重度的听力受损和正常的前庭反应，是发病最多的类型，也是备受关注的研究热点。Usher综合症Ⅱ型有三个已确认的相关蛋白：usheri

5、n、GPR98（Gprotein-couplereceptor98）以及whirlin，它们在体内会形成USH2蛋白复合体，当某个蛋白出现问题不能形成复合体就会导致USH2的发病。其中，usherin和GPR98蛋白的大部分在细胞膜外，C端均有一个PDZ结合结构域（PBM）。whirlin是一种支架蛋白，包含3个PDZ结构域和一个脯氨酸富集区（PR），whirlin在细胞内起到一个连接USH2蛋白复合体的作用，是构成USH2蛋白复合体的必要组成部分，所以与whirlin能相互作用的蛋白常被认为有可能是USH2蛋白

6、复合体的成员。研究表明，espin与whirlin都分布于感觉细胞的微绒毛中，并且在体外可以相互作用，但是espin与whirlin相互作用的机制尚不清楚。本文构建了两个能够表达whirlin蛋白N端和C端的重组载体，其中N端片段包含前两个PDZ结构域和一个PR，C端片段包含最后一个PDZ结构域。我们将whirlin重组质粒和之前构建的espin重组质粒共转染到COS-7细胞中，通过不同的荧光观察whirlin和espin在细胞中的定位。将重组质粒共转染到HEK293T细胞中，两种蛋白质在细胞裂解液中免疫共沉淀，

7、最后用WesternBlot检测whirlin和espin之间是否有相互作用。实验发现，whirlin的N端片段与espin有共定位，并且能够将细胞裂解液中的espin共沉淀下来。I在之前的研究中，whirlin曾被我们人为地分为大小相似的两个片段，其中N端片段包含前两个PDZ结构域，C端片段包含PR和最后一个PDZ结构域，而这两个片段均不能与espin相互作用。与之前的实验数据相比，whirlin和espin中包含的PR都对其相互作用有着重要的影响。虽然可能直接参与相互作用的是PDZ结构域，但是PR似乎对于wh

8、irlin和espin形成稳定的蛋白构象是必需的，是影响蛋白间相互作用的关键结构。本文为揭示USH2蛋白复合体形成的分子机制奠定了基础，并且为USH2提供了新的的治疗思路。关键词：Usher综合症；USH2蛋白复合体；whirlin；espin；PRIIAbstractUshersyndrometypeII(USH2)causesblindnessanddeafness,