甲羟戊酸激酶突变导致光敏性汗孔角化症的致病机制研究

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1、中图分类号Q呈皇UDC570硕士学位论文学校代码10533甲羟戊酸激酶突变导致光敏性汗孔角化症的致病机制研究Pathogenicmechanismofdisseminatedsuperficialactinicporokeratosis—associatedmevalonatekinasemutations名：业：向：指导教师：副指导教师：朱腾飞遗传学医学遗传学国家重点实验室夏昆研究员胡正茂副研究员论文答辩日期垫堡：厶：岁答辩委员会主中南大学2013年5月姓专方院者科究作学研学原创性声明JIIIIIIIIIIIIIIIIIIlY2424484本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导

2、下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：盐虹日期：型兰年』月鱼日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文

3、全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：县睦丝导师签名日期：塑堕年旦月鱼日硕士学位论文中文摘要摘要目的：甲羟戊酸激酶(mevalonatekinase，?I卯X)可将甲羟戊酸磷酸化为5．磷酸甲羟戊酸。前期研究中在多个光敏性汗孔角化症(disseminatedsuperficialactinicporokeratosis，DSAP)家系及散发患者中发现MVK基因突变，但是其具体的致病机制不明。本研究拟探讨MVK相关突变导致DSAP的机制，加深我们对这一疾病的认识。方法：采集正常人和患者外周血，抽提淋巴细胞总RNA，realtimePCR和RT．PCR研究mRNA表达水

4、平。构建相关真核表达载体，在HEK293中表达MVK野生型和DSAP相关突变，免疫印迹观察蛋白表达。建立MVK野生型和DSAP相关突变的HEK293稳定表达细胞系，使用放线菌酮(ChcloheximideC似)抑制蛋白合成，在不同时间点收集蛋白，免疫印迹检测MYK野生型和DSAP相关突变型的半衰期。使用蛋白酶体抑制剂(MGl32)，溶酶体抑制剂(CQ)阻断MVK的降解，免疫印迹观察MVK野生型和DSAP相关突变型的降解途径。在HEK293细胞中瞬时表达GFP标签或FLAG标签的MVK野生型和DSAP相关突变型，对过氧化物酶体、线粒体、内质网等细胞器的标志蛋白进行免疫荧光染色，研究MV

5、K野生型和DSAP相关突变型进行亚细胞定位。构建pGEX．4T．2骨架的MVK野生型及DSAP相关突变质粒，在BL21感受态中通过IPTG诱导原核表达GSTTT硕士学位论文中文摘要融合蛋白，GSTpulldown研究MVK野生型和DSAP相关突变形成同源二聚体的能力。在HEK293细胞中共转GFP标签和FLAG标签的MVK野生型和／或DSAP相关突变型，免疫共沉淀研究MVK野生型和DSAP相关突变型形成同源二聚体的能力。结果：1．A189V突变患者mRNA表达低于正常人；DSAP相关突变蛋白表达低于野生型；2．DSAP相关突变蛋白的降解较野生型蛋白明显加快；DSAP野生型和相关相关突

6、变蛋白主要通过蛋白酶体途径降解；3．MVK野生型和DSAP相关突变型为细胞质分布；MVK野生型和DSAP相关突变与过氧化物酶体、线粒体、内质网没有共定位；4．MVK野生型和A189V可以形成同源二聚体，MVK野生型不能和H312R形成同源二聚体，H312R自身不能形成同源二聚体。结论：1．MVKDSAP相关突变的细胞亚定位没有改变。2．MVKDSAP相关突变蛋白半衰期缩短，通过蛋白酶体途径降解。3．MVKH312R形成同源二聚体的能力有缺陷。关键词DSAP，甲羟戊酸激酶，蛋白半衰期，同源二聚体III硕士学位论文英文摘要AimABSTRACTMevalonatekinase(MVK)c

7、atalyzethephosphorylationofmevalonicacidinto5-phosphomevalonate．Thereareseveralmutantsionswhichhavebeenidentifiedfromavarietyofdisseminatedsuperficialactinicporokeratosis(DSAP)predigreesandsporadicDSAPpatients，butthepathogenesisre