胎盘免疫调节因子的分离纯化及其对PC12细胞生长的影响

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1、广西医科大学硕士学位论文胎盘免疫调节因子的分离纯化及其对PC12细胞生长的影响姓名：徐阳曦申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：张学荣20090501脸查鱼痤遢苴固王笪盆离纯丝霆墓盟￡￡12绁胞生量的壁响亟±堑窒生堂位i金塞胎盘免疫调节因子的分离纯化及其对PCI2细胞生长的影响摘要第一部分胎盘免疫调节因子的分离纯化及活性检测目的纯化胎盘免疫调节因子(placentafactorPF)和筛选活性最显著的组分。方法将新鲜人胎盘去筋膜，生理盐水冲净、剪碎匀浆，反复冻融后，透析，取透析外液冻干，上样于SephadexG．25凝胶层析柱，洗脱

2、，收集各组份。通过培养淋巴细胞，用MTT法鉴定PF纯化产物的活性，反相高效液相色谱分析纯产物的纯度，基质辅助激光解吸附电离串行飞行时间质谱测定产物的分子量。结果PF经SephadexG．25凝胶柱纯化后，得到的第四峰具有明显促进淋巴细胞增殖活性，是胎盘免疫调节因子的主要活性成分，是分子量为6737．813Da的多肽，其纯度为82％，结论胎盘免疫调节因子经SephadexG一25凝胶柱纯化得到的第四峰是胎盘免疫调节因子的主要活性成分，其纯度为82％，分子量为6737．813Da。关键词：胎盘免疫调节因子，凝胶层析，生物活性第二部分胎盘免疫调节因子对P

3、CI2细胞生长的影响目的：观察胎盘免疫调节因子(placentafactorPF)对PCI2细胞生长的影响。方法：培养PCI2细胞，用MTT法观察PF对体外无血清培养PCI2细胞存活率的影响及PF对低血清培养PCI2细胞增殖的影响，普通光学显微镜观察PCI2细胞形态的变化。结果：对无血清培养的PCI2细胞加入不同浓度的PF培养44小时后，PF在浓度为50乒,g／ml、25声,g／ml、12．5／,g／m1和6．25肛g／ml时可以显著提高无血清培养PCI2细胞的存活率(P

4、在浓度为12．5／．,g／ml和6．25乒,g／ml时可以显著提高PCI2细胞的数量(P

5、PFIV对体外无血清培养PCI2细胞存活率的影响及PFIV对低血清培养PCI2细胞增殖的影响，普通光学显微镜观察PCI2细胞形态的变化。结果：对无血清培养的PCI2细胞加入不同浓度的PFIV培养44小时后，在浓度为15／比g／ml、7．5∥g／ml、3．75／,g／ml和1．88／比g／ml时可以显著提高无血清培养的PCI2细胞的存活率(P

6、的PFIV培养10天，PFIV在浓度为0．118ag／ml和0．059ag／ml作用第6天时，细胞长出突起。结论：胎盘免疫调节因子第四峰(PFIV)能提高无血清培养PCI2细胞的存活率，促进PCI2细胞增殖，诱导PCI2细胞分化。关键词：胎盘免疫调节因子纯化第四峰，PCI2细胞，增殖，分化脸盘鱼瘗调苴固王数盆离缠丝丞甚怼￡￡12细胞生篮的夏堕亟±堑塞生堂僮迨塞EXPERIMENTSTUDYOFPLACENTALFACTORPURIFICATIONANDITSACTIVITYONPC12CELLSABSTRACTPartlPFPurification

7、andactivitydetectionObjective：TopurifyPFandselectthemosteffectiveactivecomponentfrompurifiedproducts．Method：Anadesmawasremovedfromfleshhumanplacenta，washouteditbysotonicNachlorideandhomogenated，freezedandthawedthreetimes，thendialyzedbybagfilterandcollecteddialysatingextracellu

8、larfluid，freeze-dried．PFwaspurifiedbySephadexG一25gelfiltratio