免疫相关受体PirB在慢性炎症脑神经元突触丢失中的作用

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1、分类号⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯UDC⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．密级⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯编号⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯十I初大学CENTRALSOUTHUNIVERSITY硕士学位论文论文题目学科专业研究生姓名导师姓名及职称免疫相关受体PirB在慢性炎症脑神经元突触丢失中的作用人体解剖与组织胚胎学艾卫敏邓小华副教授中南大学2012年11月硕士学位论文密级——删删㈣嗍㈣㈣lII

2、IY2423787免疫相关受体PirB在慢性炎症脑神经元突触丢失中的作用TheeffectofPirBonneuronalsynap埴clossduringchronicbraininflammation作者姓

3、名：艾卫敏学科专业：人体解剖学与组织胚胎学学院(系、所)：基础医学院(人体解剖学与神经生物学系)指导教师：邓小华副教授论文答辩日期选垒=!L9答辩委员会主席中南大学2012年l1月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：蔓旦敏日期：鬯!!兰年卫月羔日学位论文版权使用授权书本人了解

4、中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：冀区敏导师签魈：!：冷期：塑年旦月望日顾士学位论文摘要目的1．探讨内毒素脂多糖诱导的慢性炎症脑神经元和星形胶质细胞PirB的表达变化，突触囊泡素的表达及动物行为学的改变；2．探讨PirB在慢性炎症脑神经元突触丢失和学习记忆

5、功能缺失中的免疫调节作用。方法正常成年SD大鼠，随机分为实验组和对照组，依赖立体定位技术，在大鼠右侧海马内分别注射LPS和PBS，动物存活30天。用免疫组织化学法检测大鼠脑皮质、海马PirB、突触囊泡素的表达及星形胶质细胞GFAP的表达变化，用图像分析系统检测阳性细胞数目和染色强度；并采用westemblot技术对其进行定量分析。高尔基染色观察大鼠脑神经元结构的改变。免疫荧光双重标记技术，观察PirB阳性细胞与神经元、星型胶质细胞的共存及PirB阳性细胞与突触的关系；MoHis水迷宫测试用于评估实验组大鼠的学习和空间记忆能力。结果GFAP阳性星形胶

6、质细胞分布在整个海马结构、梨状皮质和内嗅皮质、皮质以下的白质如胼胝体等部位。海马内注射PBS的对照组动物，海马、皮质内GFAP阳性的星形胶质细胞展示出静息的形态特征：胞体小，分支细长，染色较淡。海马内注射LPS的实验组动物海马、梨状皮质和内嗅皮质内GFAP阳性星形胶质细胞明显被激活，表现为细胞胞体明显增大，突起变肥大；定量分析表明，LPS处理30天后，海马CA3区和齿状回内GFAP阳性星形胶质细胞数目和光密度0D值明显增加，差异有显著性(氏0．01)。PBS注射组动物脑皮质V层内可见PirB阳性神经元样细胞，呈圆形、卵圆形和锥体形，免疫反应产物呈棕

7、色，主要位于细胞膜上；海马内注射LPS30天后，可见较大的PirB阳性神经元样细胞和较小的PirB阳性神经胶质样细胞主要分布于皮质Ⅳ、V层、海马CAl一CA3区锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层，免疫反应产物位于胞质和突起内。定量分析表明，与对照组比较，LPS处理30d后，皮质、海马内PirB阳性神经元的数目和OD值明显增加，差异有显著性(氏O．005)。Wrestemblot定量分析：LPS处理30天后，注射侧皮质、海马内PirB蛋白质的表达均明显增加，差异有显著性(P

8、显示：皮质、海马内PirB和MAP．2阳性神经元的胞体存在共定位；PirB与GFAP阳性星形胶质细胞存在部分共定位，实验组海马内GFAP阳性星形胶质细胞明显被激活，活化的星形胶质细胞PirB表达上调，但未见PirB与CDllb阳性染色双标细胞。SYN阳性产物呈点状棕色颗粒，在PBS处理的大鼠海马主要分布于海马CAl区的始层、辐射层及分子层，CA3区阿蒙氏角神经纤维终末以及齿状回的非细胞层。与对照组相比，LPS处理的大鼠脑海马CAl区、齿状回内SYN免疫阳性产物的平均OD值明显减少，差异具有显著性(P<0．05)。SYN与PirB的免疫荧光双重标记染

9、色显示：海马CA3区苔藓纤维终端和锥体神经元胞体内SYN与PirB两者存在共定位。Westemblot定量分析：LPS处理