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《孕酮衍生物的合成与~(125)I标记》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第10卷第4期同 位 素Vol.10No.41997年11月JournalofIsotopesNov.1997125孕酮衍生物的合成与I标记黄文林 林美玲(中国原子能科学研究院同位素研究所,北京102413)125125合成了孕酮衍生物孕酮211A2半琥珀酰2组胺,并对其进行了I标记,观察了其I的最佳标记条125件。结果表明,在37MBqNaI中,pH值为714,反应物孕酮211A2半琥珀酰2组胺为5Lg及氯胺2T的质量为50Lg时,孕酮衍生物的标记率最大,可达73%。125关键词 孕酮衍生物 I标记
2、放射免疫分析孕酮(分子量为314)是具有21个碳的甾族化合物。临床上,孕酮测定主要用于确定排卵、孕激素治疗监测和早期妊娠状态的评价。自孕酮放射免疫分析法创建以来,氚标记孕酮和碘标记孕酮衍生物成为孕酮放免测定中2种主要的标记物。由于氚的测量方法复杂,测量仪器昂贵,不易推广,所以近年来碘标记孕酮放免分析有了很大的发展。在临床检测中,占据主导地位的孕酮是小分子,碘直接地标记孕酮将会影响其生物活性。为了避免这一影响,目前,常用的方法是将碘标记的组胺通过半琥珀酸或羧甲基肟连接到孕酮分子的11位或3位上,形成了碘标
3、记孕酮衍生物(孕酮211A2半琥珀酰2碘代组胺或孕酮232羧甲基肟碘代组胺)。碘标记孕酮衍生物与孕[1]酮分子对孕酮抗体的识别具有相似性。本文利用孕酮211A2半琥珀酸与组胺的缩合反应合成125125孕酮211A2半琥珀酰2组胺,然后对其进行I标记,以获得I2孕酮衍生物。1 实验材料111 主要试剂孕酮211A2半琥珀酸为SteroidInc.产品,组胺为Sigma公司产品,三正丁胺、氯甲酸异丁125酯为Fluka公司产品,二氧六环为分析纯试剂,硅胶GF254为青岛海洋化工厂生产,NaI由中国原子能科学
4、研究院生产,放射性浓度为5155GBqömL。112 主要仪器放射性薄层扫描仪(美国产)。2 实验方法211 孕酮-11A-半琥珀酰-组胺(PHH)的合成12521111 合成路线 PHH的合成及其I标记路线如下:收稿日期:1997203227 修改稿收到日期:1997206211125 第4期 黄文林等:孕酮衍生物的合成与I标记239125孕酮211A2半琥珀酰2碘代组胺(I2PHH)21112 合成方法 将1812mg的孕酮211A2半琥珀酸(P211A2HS)溶于500LL二
5、氧六环中,在10℃冷却15min,继续在冷却条件下加入38LLV(三正丁胺)÷V(二氧六环)=1÷215的溶液和35LLV(氯甲酸异丁酯)÷V(二氧六环)=1÷5的溶液;与此同时,称取25mg的组胺溶于250LL二氧六环、250LL水及25LL015molöLNaOH中,在10℃冷却25min,缓慢滴加到上述孕酮211A2半琥珀酸溶液中,继续在10℃搅拌反应3h后,放置在4℃冰箱中过夜。用硅胶GF254进行分析,展开剂为V(甲醇)÷V(水)=6÷2。PHH的Rf=0.76,P211A2'S的Rf=0.9
6、7,组胺的Rf=0。反应液用硅胶GF254薄层层析分离,用甲醇将硅胶板上的PHH洗脱下来,浓缩、结[2-4]晶。125212I-PHH的制备和标记率测定将5LgPHH(0.5göLPHH的甲醇溶液)溶于50LL0.2molöLpH7.4的磷酸缓冲液中,125然后加入37MBqNaI,振荡均匀后,再加入10LL浓度为5göL氯胺2T的磷酸缓冲液中,振荡反应2min,加10LL浓度为10göL偏重亚硫酸钠的磷酸缓冲液终止反应。用硅胶薄层分析,125125展开剂为V(氯仿)÷V(甲醇)=8÷1,I2PHH的R
7、f=0.85,I的Rf=0.10,标记率为73%,其放化纯度>95%。3 结果与讨论311 反应时间对标记率的影响按212所述方法,标记反应时间分别取015、110、210、510、1010min,测定其标记率,结果示于图1。由图1可见,反应时间对标记率的影响不大。312PHH的质量对标记率的影响125按212所述方法,在37MBqNaI中分别加入110、215、510、715、1010LgPHH进行标记240同 位 素 第10卷 125反应,测定各标记率,结果示于图2。
8、图2结果表明:在37MBqNaI中加入5LgPHH时,标记率最大。图1 反应时间对标记率的影响 图2 反应物量对标记率的影响313pH对标记率的影响按212所述方法,在四种pH不同的磷酸缓冲液(pH分别为610、710、714、810)介质中进行标记反应,测定各标记率,结果示于图3。由图3可见,当磷酸缓冲液的pH为714时,标记率最大。314 氯胺-T的质量对标记率的影响按212所述方法,分别加入氧化剂氯胺2T20、50、100
