PI3KAkt信号转导通路与沙土鼠脑缺血耐受的关系研究

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1、南京医科大学硕士学位论文PI-3K/Akt信号转导通路与沙土鼠脑缺血耐受的关系研究姓名：冯美江申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：丁新生20030416南京医科大学硕士学位论文Akt／PKBproteinkinaseB缩写词表蛋白激酶BBCIP5-bromo一4．chloro一3．indolylphosphate5-溴-4一氯一3一吲哚基磷酸Bcl一2CGNDABDNDEAAeNOSGSK一3HSPIEGIGF．1IHCIKBIKKIPITNBTBcelllymphoma-2cerebellargranule

2、neurondiaminobenzidinedelayedneuronaldeathexicitatoryaminoacidendothelialnitricoxidesythaseglycogensynthasekinase-3heatshockproteinimmediateearlygeneinsulin-likegrowthfactor1immunohistochemistryinhibitoryKappaBIkappaBKinaseischemicpreconditioningischemictolera

3、ncenitrobluetetrazoliumNF—KBnuclearfactor—kappaBB细胞辣巴瘤．2小脑颗粒神经元二氨基联苯胺迟发性神经元死亡兴奋性氨基酸内皮型一氧化氮合酶糖原合酶激酶。3热休克蛋白即早基因胰岛素样生长因子一1免疫组织化学KappaB抑制蛋白IKappaB激酶缺血预处理缺血耐受四氮唑蓝核因子一Kappa0南京医科大学硕士学位论文NGFPBSPCDPDGFPIPI一3Knervegrowthfactorphosphatebuffersalineprogrammedcelldeathplat

4、elet—derivedgrowthfactorphosphatidylinositide3'-OHkinaseSPstreptavidin·horseradishperoxidasetransientischemicattackTUNELterminaldeoxynucleotidyltransferase一神经生长因子磷酸盐缓冲液程序性细胞死亡血小板衍生生长因子磷脂酰肌醇磷脂酰肌醇一3(羟基)激酶链霉卵白素一辣根过氧化物酶短暂性脑缺血发作mediateddUTP—biotinnickendlabeling末端脱

5、氧核苷酸转移酶介导的dUTP一生物素切口末端标记南京医科大学硕士学位论文PI-3K／Akt信号转导通路与沙土鼠脑缺血耐受的关系研究摘要I亚致死性脑缺血预处理(ischemicPrec。nditi。ning,IP)可使神经元免受随后的严重缺血性损伤，该现象称之为脑缺血耐受(ischemictolerance，IT)Ⅲ。这一现象无疑为我们研究脑缺血预处理的神经保护机制提供了一个契机。目前脑IT的确切机制尚不清楚，认为可能与兴奋性氨基酸(exicitatoryaminoacid，EAA)、腺苷、即早基因(immediat

6、eearlygene，IEG)、热休克蛋白(heatshockprotein，HSP)及原癌基因B细胞淋巴瘤一2(Bcelllymphoma-2，Bcl．2)等因素有关‰3“1。Akt，又称蛋白激酶B(proteinkinaseB，PKB)，本质是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，主要通过磷脂酰肌醇3一(羟基)激酶(phosphatidylinositide3'-OHkinase，PI一3K)激活，激活后的An能使底物中的丝氨酸、苏氨酸残基磷酸化而发挥广泛的抗凋亡和细胞保护功能“1。目前，PI．3K／Akt激酶级联已被公

7、认为营养因子促进细胞存活的一个重要通路“1，但对于该信号通路与脑IT的关系尚不清楚。J，卜本课题主要探讨了PI一3K／Akt信号通路与沙土鼠脑缺血耐受的关系，即脑缺血耐受的分子机制。主要通过2minIP以诱导沙土鼠脑缺血耐受，并通过立体定向技术脑室内微量注射PI一3K的特异性抑制剂Wortmannin行预处理，采用免疫组化技术检测沙土鼠海马CAl区Akt、IKB的表达，TUNEL法原位检测锥体细胞的凋亡，透射电镜检测海马锥体细胞的超微结构改变。南京医科大学硕士学位论文本研究分为四个部分：1、脑缺血预处理对沙土鼠海马

8、CAl区Akt表达的影响；2、Akt及IKB在沙土鼠海马缺血耐受中的表达；3、PI一3K／Ala信号转导通路与沙土鼠海马缺血耐受的关系研究；4、沙土鼠脑缺血耐受时海马锥体细胞的超微结构观察。(研究表明，2rainIP能够诱导Akt的表达上调，且具有一定的时效关＼系，在再灌注后24hAkt开始有所表达，48h达到高峰，7d时基本恢复正常水平。研究发现，2rai