新城疫病毒的鸡胚培养与病毒滴度检测

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1、实验九新城疫病毒的鸡胚培养与病毒滴度检测一、目的要求掌握鸡胚接种的常规方法；学习NDV的分离培养及其鉴定方法。二、背景知识介绍病毒的鸡胚培养鸡胚是正在发育的活体：组织分化程度低；细胞代谢旺盛；适于许多病毒的生长增殖，尤其是禽类病毒。鸡胚培养的优点：来源充足；价格低廉；操作简单，无需特殊设备；易感病毒谱较广；对接种的病毒不产生抗体。鸡胚培养的缺点：非SPF鸡胚，可能含有某些家禽病毒的母源抗体，甚至还可能带有鸡白痢沙门氏菌、支原体、鸡白血病病毒、鸡贫血病毒等。鸡胚接种的方法：尿囊腔接种：绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种静脉接种鸡胚接种的方法：尿囊腔接

2、种绒毛尿囊膜接种：卵黄囊接种羊膜腔接种静脉接种鸡胚接种的方法：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种：羊膜腔接种静脉接种鸡胚接种的方法：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种：静脉接种鸡胚接种的方法：尿囊腔接种绒毛尿囊膜接种卵黄囊接种羊膜腔接种静脉接种：新城疫病毒副粘病毒科/副粘病毒亚科/禽腮腺炎病毒属。新城疫的病原体。形态：病毒子多呈球形；单股负股RNA；核衣壳螺旋形对称；有囊膜；囊膜表面有纤突。血凝性：可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。病毒分离培养：9~11日龄鸡胚尿囊腔接种。常规接种工具：注射器、打孔器、酒精灯等；待接种的新城疫病毒材料；

3、9~11日龄鸡胚（1个/人）；灭菌生理盐水；其他：镊子、照蛋器；酒精棉球、碘酊棉球；固体石蜡；灭菌瓶子、灭菌吸管等。三、实验材料四、实验内容照胚：取9~12日龄发育良好的鸡胚，观察气室及胚胎位置，标出气室底边，在无大血管处标出尿囊腔注射部位。以尿囊腔接种为例，介绍新城疫病毒的接种方法：消毒气室向上放置鸡胚于卵架上；先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋壳所标记的位置。打孔在所标记注射部位用剪刀尖端打孔；注意用力要稳，恰好使蛋壳打通而不伤及壳膜。距气室底边0.5cm注入病毒材料用1mL注射器抽取接种物；针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内；注入待接种的

4、新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。封孔用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔。孵育与观察气室朝上于37℃温箱中孵育；以后每天检卵1~2次。弃去24h内的死亡鸡胚：机械损伤、细菌或霉菌污染等引起。病毒的收获与鸡胚的观察收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血;取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面；用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜；以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取尿囊液，置无菌容器中保存备用。一般能尿囊液6-10mL。取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。新城疫病毒滴度的检测血凝试验（HA）凡能使鸡

5、红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数,称为该病毒的血凝滴度。六、思考题鸡胚接种过程中，应该注意的问题？接种病毒后，24h内鸡胚死亡原因？如何判断新城疫病毒的血凝滴度？临床上还有哪些病毒具有血凝性？放映结束！敬请各位的批评指导！谢谢观看