ikkα参与调控uvb刺激作用下p53诱导活化的胞内信号转导机制研究

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1、单位代码１０４７５学号１０４７５３１２１０１８分类号２８ＱＩ？皆為乂聲硕壬学位论文ＩＫＫａ参与调控ＵＶＢ刺激作用下ｐ５３诱导活化的胞内信号转导机制研究学科、专业；生物学、细胞生物学硏究方向：细胞信号转导申请学位类别：理学硕±申请人：王钉丽指导教师：马远方教授宋伦研究员二〇—五年五月SIGNALINGEVENTSINVOLVINGINMEDIATINGIKKα-DEPENDENTP53TRANSACTIVATIONINTHECELLUALRUVBRESPONSESADissertationSubmit

2、tedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceByWangHongliSupervisor:Prof.MaYuanfangProf.SongLunMay,2015摘要背景紫外线(Ultravioletradiation,UV)是一种典型的的环境损伤因素；根据波长大小可分为UVA（320-400nm）、UVB（280-320nm）和UVC（200-280nm）三种类型。其中UVB是诱导机体发生损伤效应的关键因

3、素。UVB除了能够诱导VEGF、TNFα等一系列炎性因子分泌和诱导表达并介导炎性损伤效应外，还能够通过诱导p53活化并介导DNA损伤效应。我们的前期工作研究结果已经揭示了UVB诱导炎性损伤效应发生的分子机制，因此本论文着重讨论UVB诱导p53活化并介导DNA损伤反应的分子机制。随着IKK/NF-κB信号途径研究的不断深入，一些NF-κB和IκB非相关的新型IKK激酶底物分子被相继发现，提示负责启动IKK/NF-kB信号通路诱导活化的关键上游信号分子IKK激酶具有诱导NF-κB途径活化以外的新功能。IKK作为IKK激酶的一个重要的催化亚基，它能够通过激活一系列NF-κ

4、B非相关的信号蛋白分子并以NF-κB非依赖方式参与多种生物学反应。本课题组长期从事IKKα不依赖于IKKβ和NF-κB的新功能机制研究，并在UVB诱导的细胞损伤反应模型中取得了一些研究进展。我们发现：IKK能够不依赖于NF-κB调控UVB刺激作用下VEGF的诱导表达，并且介导了炎性损伤效应。目的探索IKK激酶催化亚基IKK参与调控UVB诱导p53活化并介导DNA损伤反应的分子机制。方法采用双荧光素酶报道基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性；通过WesternBlot检测Hacat和MEFs细胞中p53ser15(人)/ser18(鼠)、ATR

5、、ATM、CHK1、LKB1和PERK蛋白的表达；免疫共沉淀检测在生理状态下内源IKKα与ATR、ATM、CHK1、LKB1、PERK是否存在相互作用，通过流式细胞术探讨了p53与IKKα对凋亡反应的敏感性。I结果1、我们发现UVB能够通过诱导Hacat和MEFs细胞中p53活化而介导促细胞凋亡效应，同时我们确定了IKKα在p53的诱导活化及促细胞凋亡反应中发挥关键作用。2、IKKα能够与经典DNA损伤信号途径ATR-ATM/CHK1之间发生功能联络并介导p53的诱导活化反应。期间，IKKα与CHK1发生相互结合反应是影响ATR-ATM/CHK1蛋白复合体形成的关键因

6、素。IKKα基因缺失或功能障碍条件下，ATR和ATM无法结合CHK1，以上所有信号分子的诱导活化反应被抑制，因此造成p53活化反应受抑。3、IKKα也能够与能量代谢应激因子LKB1之间发生功能联络并介导p53的诱导活化反应。IKKα的存在是影响LKB1与p53形成蛋白复合体的关键因素。IKKα基因缺失或功能障碍条件下，LKB1无法结合p53并导致p53活化反应受抑。4、UVB能够诱导Hacat和MEFs细胞中PERK活化，并且IKKα还能够通过激活PERK介导p53的诱导活化反应。IKKα也可结合于PERK/p53蛋白复合体；但IKKα的存在并是PERK与p53之间发

7、生相互结合作用的前提条件。结论1、揭示了IKKα/ATR-ATM/CHK1/p53信号通路在介导UVB诱导细胞损伤反应中的作用机制；2、LKB1是实现UVB刺激作用下IKKα调控p53诱导活化的另一关键信号传递分子；3、IKKα可以通过调控内质网应激反应进而实现诱导p53活化的信号转导机制。关键词：UVB，IKKα，p53，ATR，CHK1，LKB1，PERKIIABSTRACTBackgroundUV(ultravioletradiation)isatypicalenvironmentalstressor,whichcanbedividedinto