dedd对人乳腺癌mcf-7细胞耐药性的影响及相关机制研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122512HebeiMedicalUniversity科学学位DEDD对人乳腺癌MCF-7细胞耐药性的影响及相关机制研究研究生：孙志广导师：李灵芝教授吕琪讲师专业：药理学二级学院：武警后勤学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公共和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、

2、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：导师签章二级学院签章：年（月）曰河北医科大学研究生论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容之外，文中不包括其他人己经发表或撰写的研宄成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：HpJ导师签章:in年6月义曰目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………5英文缩写……………………………………………………

3、………………10研究论文DEDD对人乳腺癌细胞MCF-7耐药性的影响及相关机制研究前言…………………………………………………………………....11材料与方法…………………………………………………………..12结果…………………………………………………………………..24附图…………………………………………………………………..29附表…………………………………………………………………..49讨论…………………………………………………………………..59结论…………………………………………………………………..64参考文献…………………

4、…………………………………………..65综述肿瘤细胞多药耐药机制进展……………………………………....70致谢………………………………………………………………………..78个人简历…………………………………………………………………..79中文摘要DEDD对人乳腺癌MCF-7细胞耐药性的影响及相关机制研究摘要目的：以人乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象，通过转染DEDD-shRNA建立稳定干扰DEDD表达的MCF-7细胞株，对比性研究DEDD基因在MCF-7细胞肿瘤耐药中的作用，并阐明DEDD在调节乳腺癌耐药中的作用机制，为乳腺癌的治疗提

5、供新的策略和实验依据。方法：1野生型(wildtype,WT)人乳腺癌MCF-7购买于中国医学科学院&北京协和医学院细胞中心，MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA稳定细胞株由本实验室前期通过转染带有相应shRNA片段的质粒经潮霉[20]素筛选构建完成。细胞培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，其中MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞另加入维持浓度潮霉素350μg/mL，置于含有5%CO2饱和湿度的37℃培养箱中培养。2采用MTS法检测多柔比星、紫杉醇对MCF-7WT、M

6、CF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞活力的影响。3流式细胞术检测多柔比星、紫杉醇对MCF-7WT、MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞作用24h时细胞凋亡情况。4RT-PCR法检测干扰DEDD表达后抗肿瘤药物(多柔比星、紫杉醇)作用24h、48h后MCF-7WT、MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞中ABCB1基因、ABCG2基因的表达情况。5Westernblot蛋白印记法检测干扰DEDD表达后0.5μM多柔比星、8μg/ml紫杉醇对M

7、CF-7WT、MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞P-gp蛋白、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的表达变化。6Westernblot蛋白印记法检测MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞中Bcl-2、Bcl-xl、Bak、Bax蛋白的表达。7RT-PCR检测MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞中Bcl-2基因的表达。8Westernblot蛋白印记检测加入Cycloheximide(CHX)干预后MCF-7controlshRNA、MCF-7DE

8、DD-shRNA细胞中Bcl-2蛋白降解情况。1中文摘要9MTS法检测Bcl-2抑制剂ABT-199对人乳腺癌MCF-7controlshRNA、MCF-7DEDD-shRNA细胞活力的影响。10MTS法检