cox-2过表达载体的构建及其在hscs中的表达

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1、分类号民密级公开—ＵＤＣ６１０学校代码１０５５５＠或＃义拿硕±学位论文（专业学位）ＣＯＸ－２过表达载体的构建及其在ＨＳＣｓ中的表达研究生姓名：盛婷指导教师、职称；傅念副教授专业学位类别（领域）：临床医学（内科学）研究方向：肝纤维化的防治所在学院：南华大学附属南华医院二０—五年五月ＵＮＩＮＡＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＯＵＴＨＣＨ论义题目ＣＯＸ－２过表达载体的拘建及其在ＨＳＣｓ中的表达论文作者签名：？指导教师签名？论文评阅人１；阳学风，教授，硕导，南华大

2、学附属南华睽院评阅人２；宾文亂，副教授，硕导，南华大学附属南华医院答辩委员会主席；张明亮，教授，硕导，南华大学附属第二医院委员１：张刷，教授，硕导，南华大学附属第二医院委员２；吴清，主任医师，硕导，南华大学附属南华医院委员３；左建宏，副教授，硕导，南华大学国际学院委员４教授，南华大学附属南华医院；巧杨，副答辩日期；２０１５年５月１３日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导巧指导下进行的研究工作及取得的研巧。成果尽我所知，除了论文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他

3、人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。＾作者签名：年月与日南华大学学位论文版权使用授权书位论本学位论文是本人在南华大学攻读（博／硕）±学位期间在导师指导下完成的学文。本论文的研巧成果归南华大学所有，本论文的研巧内容不得Ｗ其它单位的名论义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可公布学位

4、论文的全部或部分内容，可采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学会信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向化公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。兴一作者签名：ＣＴ年ｒ月日？＂导师签名：年＾月巧日资金资助本研究论文受国家自然科学基金（编号81373465）支持资助。COX-2过表

5、达载体的构建及其在HSCs中的表达摘要：目的：构建COX-2过表达载体，并转染至HSC-T6中观察其表达情况，为进一步研究COX-2与HSC生物学功能的关系提供前期准备。方法：1.调取COX-2鼠源全长基因，TRIzol法抽提大鼠肝总mRNA,逆转录为cDNA建立文库。2.用RT-PCR扩增得到COX-2目的片段，PCR产物和pcDNA3.1(+)质粒双酶切处理后将COX-2基因片段连接至pcDNA3.1(+)载体上，将构建成的pcDNA3.1(+)-rCOX-2转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，在含50μg/mlKanaLB固体平皿上筛选

6、阳性克隆菌株。3.筛选后再对pcDNA3.1(+)-rCOX-2进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定和测序的分析。4.将构建成功的pcDNA3.1(+)-rCOX-2表达载体经脂质体转染入HSC-T6细胞，进行实验分组：HSC-T6细胞组（空白组），pcDNA3.1(+)-rCOX-2组（COX-2过表达组）；pcDNA3.1（+）组（空载体组）。转染48小时后应用Real-timePCR检测表达载体在HSC-T6中COX-2mRNA的表达情况。结果：1.RT-PCR产物显示在1800bp左右出现目的条带。2.将所得的目的基因酶切鉴定及序列分析，

7、测序结果表明和GenBank的COX-2基因序列一致，pcDNA3.1(+)-rCOX-2表达载体构建成功。3.pcDNA3.1(+)-rCOX-2表达载体转染入HSC-T6细胞后显示：COX-2mRNA在pcDNA3.1(+)-rCOX-2组中表达明显高于空白组和空载体组，统计学处理有显著意义(P＜0.01)。结论：1.成功构建了大鼠COX-2过表达载体。2.所构建的pcDNA3.1(+)-rCOX-2表达载体可在HSC-T6细胞中获得I高表达，为进一步研究COX-2与HSC生物学功能的关系提供了前期准备。关键词：COX-2；过表达；HS

8、CsIITHECONSTRUCTIONOFCOX-2OVER-EXPRESSIONVECTORANDWHICHEXPRESSINHSCSShengTing(ClinicalMed