广西本地水牛和陆川猪毛色形成的分子机制研究

《广西本地水牛和陆川猪毛色形成的分子机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、巧去擎化伦义广西本地水牛和陆川猪毛色形成的分子机制研究林宇舒爲席乂學－？、：■—：品五年五月．．．．－．广■？－分类号Ｓ８１３．１密级公中ＵＤＣ＇硕±学位论文广西本地水牛和陆川猪毛色形成的分子机制研究林宇绿学科专业动物遗传育种与繁强指导教师石德顺研究贵崔奎青教授论文答辩日期２０１５年５月％日学位授予日期化答辩委员会主席卢克焕教授论文评阅人广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究

2、所取得的研究成果。除已特别加１＾＾标注巧致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大一？学或其它单位的学位而使用过的材料。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均己在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被査阅和借阅，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可采

3、用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。过不保密。＂＂（请在Ｗ上相应方框内打Ｖ）论文作者签名：許如争日期：指导教师签名日期作者联系电话；电子邮箱：广西本地水牛和陆川猪毛色形成的分子机制研究摘要毛色是识别动物品种和种属的重要特征，也是动物品种培育中遗一传致性观测的重要指标。畜禽之间毛色差异主要是由于黑色素细胞中真黑素和褐黑素的存在、分布和比例差异造成。本研究本地沼泽型水牛和陆川猪为研究对象，应用ＰＣＲ的方法克隆ＭＣ化基因的编－ＭＣ码区

4、序列，通过ｑＲＴＰＣＲ技术分析毛色形成的相关基因（１Ｒ、ＫＩＴ、ＭＩＴＦ、ＴＹ民、ＴＹＲＰ１、ＤＣＴ和ＥＤＮＲＢ）在不同毛色牛皮肤組织和陆川猪黑ｓｔｅｍ－ｔ、白皮肤组织上的表达，并应用Ｗｅｂｌｏ的方法检测ＭＣ１Ｒ、ＭＩＴＦ和ＴＹＲ蛋白在牛和陆川猪黑白皮肤上的蛋白质表达水平，还应用ＨＥ染色观察了陆川猪皮肤的结构和应用免疫组化技术对ＴＹＲ蛋白在陆川猪皮肤上定位进行分析。主要研究结果如下：１．广西本地沼泽水牛和陆川猪ＭＣＩ反基因的克隆与分析。测序结果显示水牛和陆川猪ＭＣＩ反基因的编码区片段大小分别为９５４ｂｐ和１１１５

5、ｂｐ，分别编码３１７个和３２１个氨基酸。相同的方法克隆并测序了本地饲养的摩拉水牛、白化沼泽水牛和黄牛的ＭＣＩ民基因序列，通过多重序列比对发现，沼泽水牛与白化沼泽水牛ＭＣ１Ｒ基因有几４７６－ＶＴ１８处碱基发生置换。在第个碱基位点上由Ｃ，第６个碱基位点由Ｃ一Ｇ，８８１个碱基位点Ａ一Ｇ，９３０和９３１的碱基位点ＧＡ一ＡＧ。第１巧个氨基酸由丝氨酸变成了苯丙氨酸，第３１０个氨基酸由谷氨酸Ｉ，第２９４个氨基酸由天冬氨酸变成了丙氨酸变成丙氨酸，发生了非同义突变。第２０６个氨基酸依然是酪氨酸，该处对应碱基发生的是同义突

6、变。２．毛色形成相关基因在几种牛皮肤中的表达谱构建及蛋白表达ＲＴ－ＰＣ民技术分析。应用ｑ，检测了毛色形成的相关基因（ＭＣｎＲ、口Ｔ、ＭＩＴＦ、ＴＹＲ、ＴＹＲＰ１、ＤＣＴ和ＥＤＮＲＢ在几种牛皮肤组织的表达。）结果湿示，白化沼泽水牛皮肤中表达的ＭＣＩ民、ＫＩＴ、ＭＩＴＦ和ＴＹＲ基因含量显著低于这些基因在沼泽水牛、摩拉水牛和黄牛皮肤中的表达量（Ｐ＜０．０５）。摩拉水牛皮肤酪氨酸酶家族（ＴＹＲ、ＴＹＲＰ１和ＤＣＴ）基因在ｍＲＮＡ水平表达量显著高于沼泽水牛、白化沼泽水牛和黄牛（Ｐ＜０．０５）。ＤＣＴ基因在摩拉水牛皮肤的表达

7、量显著高于沼泽水牛和白化沼泽水牛（Ｐ＜０．０５）。在白化沼泽水牛和黄牛几乎检测不到ＴＹＰＲ１ｗｅｓｅｍ－ｂ的表达。应用ｔｌｏｔ技术，检测ＭＣ１Ｒ、ＭＩＴＦ和ＴＹＲ基因在蛋白质水平上在几种牛皮肤上的表达情况。结果显示，摩拉水牛ＭＣ１Ｒ、ＭＴＦ和ＴＹＲ表达量低于沼泽水牛。白化沼泽水牛在所选的这Ｈ个基因蛋白中的表达情况也是低于沼泽水牛，尤其是白化沼泽水一牛ＴＹＲ基因蛋白条带非常浅ＲＴ－ＰＣ民试验结，这与上步进行的ｑ果一致。３．毛色形成相关基因在陆川猪黑、白皮肤中的表达谱构建及蛋－ＭＣ白表达分析。应用ｑＲＴＰＣ民技术

8、检测了毛色形成的相关基因（Ｉ民、Ｋ一ＩＴ、ＭＩＴＦ、ＴＹＲ、ＴＹＲＰ１、ＤＣＴ和ＥＤＮＲＢ）在同头陆川猪黑、。白皮肤组织的表达结果显示，在