peg介导的苹果果生刺盘孢colletotrichum fructicola原生质体转化体系的研究

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1、学校代码：10712分类号：S432.1研宄生学号：2012050116UDC：582.28密级：公开兩灶农林令长大学2015届攻读硕士学位研究生学位（毕业）论文pEG介导的苹果果生刺盘孢Co//伽的’c/mm原生质体转化体系的研究学科专业植物病理学_研究方向真輕__研究生韩小一1_指导教师张皇完成时间中国陝西杨凌Classificationcode:S432.1Universitycode:10712UDC:582.28Postgraduatenumber:2012050116Confidenti

2、alitylevel:PublicityThesisforMaster’sDegreeNorthwestA&FUniversityin2015PEG-MEDIATEDTRANSFORMATIONOFCOLLETOTRICHUMFRUCTICOLAMajor:PlantPathologyResearchfield:FungiandfungaldiseaseNameofPostgraduate:HanXiaoluAdviser:Prof.ZhangRongDateofsubmission:May25,2

3、015YanglingShaanxiChina研究生毕业论文的独创性声明本人声明••所呈交的硕士毕业论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本

4、研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。导师指导研究生毕业论文的承诺导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我现岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。时间：zwj■年j一月日关于研宄生毕业论文使用授权的说明本毕业论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门

5、或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本毕业论文及其相关的工作成果时，将以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人（包括研究生本人）未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的毕业论文在保

6、密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）PEG介导的苹果果生刺盘孢Colletotrichumfructicola原生质体转化的研究摘要由刺盘孢菌引起的苹果炭疽类病害是当前我国苹果生产中主要病害之一，可引起早期大量落叶，以及果实生长期和贮藏期的腐烂，造成严重的经济损失。其中引起苹果大量落叶的病害又称之为苹果炭疽叶枯病。苹果炭疽叶枯病为我国苹果生产中出现的一种新病害，引起嘎啦、秦冠等品种早期大量落叶、果实产生大量褐色斑点，给果农造成严重的经济损失。本研究室前期的研究

7、明确了苹果炭疽叶枯病的病原菌为果生刺盘孢Colletotrichumfructicola和隐秘刺盘孢C.aenigma，其中C.fructicola为优势种。本研究拟以果生刺盘孢菌株SQ06-E为供试菌株，利用PEG介导的遗传转化方法将质粒pCB1003和pRM7转入果生刺盘孢原生质体中，建立PEG介导的果生刺盘孢原生质体遗传转化体系，并获得GFP标记的果生刺盘孢菌株。取得以下主要研究结果：1.优化了菌龄、酶浓度、酶解时间、渗透压稳定剂对原生质体质量和产量的影响因素等条件，获得果生刺盘孢原生质体制备

8、最优条件为：浓度为1×106个/mL的分生孢子在M3S培养基中经28℃、200r/min震荡培养8h；过滤收集菌丝，用浓度为2.5%崩溃酶+1%溶壁酶的混合酶解液酶解3h；整个试验中渗透压稳定剂为0.8mol/LKCl。按10mL酶解液/0.5g菌丝的比例，可获得3×107个/mL的原生质体。该体系稳定、产生原生质体效率高，可以用于果生刺盘孢及其近似种的原生质体转化研究。2.建立了PEG介导的果生刺盘孢稳定、高效原生质体遗传转化体系，获得76个含hph基因的转化子，转