金属硫蛋白细胞表面展示提高酵母对重金属吸附的能力

金属硫蛋白细胞表面展示提高酵母对重金属吸附的能力

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时间:2019-03-12

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1、犬裡?大學DALIANUNIVERSITYOFTECHNOLOGYfi面士室位论文MASTERALDISSERTATION—oII金属硫蛋白细胞表面展示提高酵母对重金属吸附的能力生物化工学禾斗专业作者姓名i??陈丽杰副教授指导教师20156答辩曰期^__^硕士学位论文金属硫蛋白细胞表面展示提高酵母对重金属吸附的能力EnhancedBiosorptionofHeavyMetalbyDisplayingMetallothioneinonCell

2、SurfaceofSaccharomycescerevisiae作者姓名:汤晓燕学科、专业:生物化工学号:21218116指导教师:陈丽杰副教授完成日期..:201454大遠理工大旁DalianUniversityofTechnology金属硫蛋白细胞表面展示提高酵母对重金属吸附的能力大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除文中已经注明引用内容和致谢的地方外,本论文不包含其他个人或集体巳经发表的

3、研究成果,也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果一。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处,本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目:乏命是输_圭4科靖她b作者签名:^曰期:…y年<月日--II大连理工大学硕士学位论文摘要本论文利用细胞表面展示蛋白a-凝集素将金属硫蛋白表达在酵母细胞(Saccharomcescerevisiae)表面y,其中金属硫蛋白基因通过HO位点整合在酵母染色体上2+2+^,最终获得对Cd、Cu和Ci具较高耐受性和吸附

4、性能的重组菌S.cerevisiaeHA2+2+6+Cg,并对其吸附重金属Cd、Cu和Cr的机理进行探讨。利用PCR的技术获得了S.cerevisiae288c金属硫蛋白基因cupl’将cupl连接到pYDl质粒中以构建金属硫蛋白细胞表面展示游离载体pYDl/a(p7;然后从pYDl/cMp?中克隆出金属硫蛋白细胞表面展示盒子及从S-.cerevisiae288c获得3憐酸甘油酸激酶启动子基因P腿-’以H02作为出发载体构建金属硫蛋白细胞表面展示整合载体HACg和空载对照HAg。将HACg和HAg分别转入S.ce

5、revisiae4126中,得到重组菌ScerevisiaeHAC、S.cerevisiaeA。.gHgS.ceisirevaeHAC对重金属耐受性和吸附性能研究表明.cerevisiaeHACg,Sg对2+2+&Cd、Cu和Cr的耐受性与出发菌株相比有显著提高比S.cefevisiae;与对照菌株相,2+2+HACg对Cd50m/L的去除率可提髙19.39%;S.cerevisiaeHAC对Cu50m/L的(g)g(g)去除率可提高^13.35%0mL;HACgCr(5g/)还原所需时间与

6、出发菌株比较缩短6h,可降低333%。.33%,对总Cr的去除率与出发菌比可提高了10.1扫描电镜结果表明,重金属吸附以后金属硫蛋白细胞表面展示菌体表面皱缩程度及菌体凹陷程度要远小于对照菌株,说明金属硫蛋白在细胞表面表达对酵母菌抵制重金属的毒害作用具有重要的作用;傅里叶红外光谱结果表明,酵母细胞中幾基、轻基、氨基、磷酸基及酰胺基是参与重金属离子结合的主要官能团,而金属硫蛋白在酵母细胞表面表达后对细胞参与金属离子结合的官能团没有影响;微生物电化学结果分析表明:金属硫蛋白在细胞表面表达细胞表面官能团数量增加,酵母菌吸附重金属

7、以后,酵母细胞表面的官能团得失电子能力发生改变。2+2+C等温吸附模型拟合表明S.cescerevisiaeHACg对Cd、Cu、总r的吸附过程分别符合Langmuir、Freundlich、FreundHch吸附等温模型。关键词:酵母;金属破蛋白细胞表面展示;;重金属;吸附I金属硫蛋白细胞表面展示提高酵母对重金属吸附的能力EnhancedBiosortionofHeavMetalbDislainMetallothioneinonpyypygCellSurfaceofiiSaccharo

8、mycescerevsaeAbstractInthisstudtwoenine

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