落葵皱缩花叶病毒紫茉莉分离物基因组序列测定及cp基因原核表达载体的构建与抗体制备

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1、分类号密级公开编号碩士所究嗲像儉夂题目：落葵皱缩花叶病毒紫茉莉分离物基因组序歹丨测定及基因原核表达学院（所、中心）生命科学学院专业名称植物学研究生姓名任龙辉学号导师姓名陈穗云职称教授导师姓名王建光职称副教授年月论文独创性声明及使用授权本论文是作者在导师指导下取得的研宄成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不存在剽窃或抄袭行为。与作者一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。现就论文的使用对云南大学授权如下：学校有权保留本论文（含电子版），也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文；学校有

2、权公布论文的全部或部分内容，可以将论文用于查阅或借阅服务；学校有权向有关机构送交学位论文用于学术规范审查、社会监督或评奖；学校有权将学位论文的全部或部分内容录入有关数据库用于检索服务。内部或保密的论文在解密后应遵循此规定）研究生签名：錄感导师签名日期：云南大学硕上学位论文摘要本论文对侵染紫茉莉的落葵皱缩花叶病毒、的生物学特性开展了系统研究。测定了的部分基因组序列、构建了基因的原核表达载体，并获得了基因蛋白抗体。结果表明：、受侵染的紫茉莉均表现为花叶，部分叶片出现畸形或斑驳症状；在电镜下观察，发现该病毒粒子呈线状，大小约为接种实验表明，该病毒能够注射侵润接种，不能摩擦接种

3、，釆用注射侵润接种成功侵染本氏烟，经及检测表明侵染率达到以上。、对基因组序列进行了测定，完成了除’及部分基因以外序列的测定工作。对测定序列进行核苷酸和氨基酸序列多重比对分析，结果显示的蛋白切割位点中和以及和的切割位点发生了变化，与蚜传相关的‘’保守基序也变成了‘’，以阅读框相位编码，含有典型的基序；对该病毒基因的氨基酸序列同源性比对分析与系统进化树分析表明，应是病毒的不同分离物，但是基因，’和部分序列核苷酸及氨基酸序列同源性结果显示是独立于病毒的一个新病毒种。。、通过克隆病毒基因，并进行序列分析，成功构建了原核表达载体。用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并

4、利用和检测并验证了该抗体的可用性，结果表明，该抗体具有较高的效价及特异性，可用于后续检测，为后续云南地区的检测及相关研宄提供了可靠的检测方法。关键词：紫茉莉、落葵皱缩花叶病毒、遗传差异分析、原核表达载体的构建、抗血清制备云南大学硕丄学位论文、，、‘’，‘，“”、云南大学硕士学位论文目录顧录第一章文献综述马铃薯病毒属研宄进展马铃薯病毒属病毒的一般特性马铃薯病毒属病毒分子生物学特性马铃薯病毒属病毒分类标准的确立落葵皱缩花叶病毒的研宄进展落葵皱缩花叶病毒的研宄现状落葵皱缩花叶病毒的普通生物学特性落葵皱缩花叶病毒的病毒粒子落葵皱缩花叶病毒的寄主范围落葵皱缩花叶病毒的植物病症落葵

5、皱缩花叶病毒的分子生物学特性侵染紫茉莉植物病毒的研究进展紫茉莉植物的分类学特征侵染紫茉莉植物病毒的研究进展原核表达载体的构建及诱导表达技术原核表达体系原核表达策略原核表达产物的分离纯化本研究的目的及意义第二章材料与方法云南大学硕上学位论文概病样和无毒苗菌株与载体质粒试剂与仪器试剂主要仪器设备方法生物学病毒接禾中电子显微镜观察序列测定和分析抽提第一链合成聚合酶链式反应片段切胶纯化连接感受态细胞制备转化和筛选质粒提取重组质粒的鉴定序列测定和分析血清学基因原核表达载体构建蛋白白勺电泳蛋白原核表达诱导条件的优化蛋白大量表达及纯化云南大学硕上学位论文目的蛋白纯化蛋白浓度测定蛋白抗

6、血清制备蛋白免疫印迹电泳分离目的蛋白蛋白印迹第三章结果与分析生物学紫茉莉花叶病症状紫茉莉感病叶片电镜观察接种观察基因组序列测定和分析基因组序列测定序列分析的系统进化分析基因及’的系统进化分析基因的系统进化分析序列的系统进化分析鮮原核表达载体的构建与鉴定基因的诱导表达及检测重组蛋白原核表达及诱导条件优化诱导温度的优化诱导时间的优化诱导浓度的优化重组蛋白的大量表达免疫家兔制备蛋白多克隆抗血清云南大学硕士学位论文间接评估抗血清效价蛋白多克隆抗血清检测间接法检测感病毒植株第四章分析与讨论鮮基因组序列测定和分析血清学第五章结论与展望结论展望参考文献附录核苷酸序列及氨基酸序列信息附

7、录实验中常规溶液及培养基的配制方法附录病毒缩写与中英文对照在读期间参与项目和发表论文髓云南大学硕士学位论文第一章文献综述马铃薯病毒属研究进展马铃薯病毒属（是马铃薯病毒科（中最大的一个属，也是已确定植物病毒中仅次于双生病毒科（菜豆金色黄花叶病毒属（识的第二大属，到目前为止，有确定种个，暂定种个，占科成员的以上该属大多数成员能够侵染双子叶植物，部分也可以侵染单子叶植物，许多成员都对粮食和经济作物产生严重危害，在世界范围内造成了非常严重的经济损失。根据在年上半年公布的最新植物病毒分类系统，将马铃薯病毒科分为马铃薯病毒属（砂、甘薯病毒属（歸、柘橙