中国明对虾(fenneropenaeus chinensis)卵巢及肝胰腺消减文库的构建及分析

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号M100101026上海海洋大学硕士学位论文中国明对虾（Fenneropenaeuschinensis）卵巢及肝题目：胰腺消减文库的构建及分析ConstructionandAnalysisofSubstractedLibrary英文题目：inOvaryandHepatopancreasofshrimpFenneropenaeuschinensis专业：水产养殖研究方向：水产动物繁殖与发育生物学姓名：杨波指导教师：蔡生力、刘红二O一三年四月二十一日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声

2、明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用

3、影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文中国明对虾（Fenneropenaeuschinensis）卵巢及肝胰腺消减文库的构建及分析摘要中国明对虾，是我国重要的海水养殖种类，属节肢动物门、甲壳纲、十足目、对虾科、明对虾属。本研究中通过外部观察、性腺指数以及石蜡切片的方法并参照前人研究将中国明对虾的卵巢发育分为卵原细胞增殖期

4、、卵黄发生前期、初级卵黄发生期、次级卵黄发生期和消退期等五个时期。然后利用抑制性消减杂交技术（SSH）分别构建卵原细胞增殖期和初级卵黄发生期的卵巢和肝胰腺的正反向消减文库以及卵黄发生前期和消退期卵巢和肝胰腺的正反向消减文库，测序结果与GenBank进行BLASTx同源比较，并利用GO分析进行功能注释，最后选取部分差异表达的基因进行荧光定量PCR技术，研究差异表达的基因在卵巢各个不同发育时期的表达水平及变化，分析这些基因的表达特性与功能之间的关系，以及与卵巢发育之间的关系。消减结果显示，各文库中的差异表达基因与该文库的卵巢发育时期相互吻合。卵原细胞增殖期的卵巢消减

5、文库中筛选到的基因主要参与细胞进程，尤其是与细胞增殖分化（有丝分裂）相关。卵黄发生前期、初级卵黄发生期和消退期筛选到的基因主要是参与蛋白合成、能量代谢及信号传导等基因，推测这些基因可能在卵黄发生和皮质棒的形成等过程中有重要作用。利用荧光定量PCR分别检测了peritrophinmRNA、cytochromeoxidaseImRNA、polehole-likeproteinmRNA和vitellogeninmRNA等差异表达的基因在卵巢各不同发育时期的表达水平及变化。这些基因表达量在初级卵黄发生期都是最高的。其中polehole-likeproteinmRNA和v

6、itellogeninmRNA在初级卵黄发生期的表达量是其他时期的几十甚至几百倍。polehole-likeproteinmRNA在初级卵黄发生期肝胰腺表达量最高，vitellogeninmRNA在初级卵黄发生期的卵巢中表达量最高，显示这两个基因在初级卵黄发生期的卵巢和肝胰腺中较活跃。关键词：中国明对虾卵巢肝胰腺抑制性消减杂交荧光定量PCR上海海洋大学硕士学位论文ConstructionandAnalysisofSubstractedLibraryinOvaryandHepatopancreasofshrimpFenneropenaeuschinensisAbs

7、tractFenneropenaeuschinensis,isaneconomicallyimportantaquaculturespeciesinChina.ItstaxonomybelongtothephylumArthropoda,classCrustacea,orderDecapoda,familyPenaeidae,genusFenneropenaeus.Inthepresentstudy,thedevelopmentalstagesofChineseshrimpovarianweredeterminedintofivestages:oogoniump

8、roliferation