一inos在高脂饮食诱导的学习记忆缺失中的作用及机制研究;二白藜芦醇苷对鱼藤酮诱导帕金森病的保护作用及机制研究

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1、南方医科大学2010级博士学位论文一：iNOS在高脂饮食诱导的学习记忆缺失中的作用及机制研究二：白藜芦醇苷对鱼藤酮诱导帕金森病的保护作用及机制研究1：EffectofiNOSonlearningamnesiainducedbyhigh—fatdiet2：Piceidattenuatesbehavioralimpairmentinarotenone—inducedratmodelofParkinson’Sdisease课题来源：国家自然科学基金(No．30973518)“重大新药创制”科技重大专项“十一五”计划(No．2009ZX09102．044)学位申请人陈玉嫔导师姓名专业名称培养类型培养

2、层次所在学院徐江平，廖方药理学学术型博士研究生药学院2013年5月20日广州博士学位论文第一部分iNOS在高脂饮食诱导的学习记忆缺失中的作用及机制研究博士研究生：陈玉嫔指导教师：徐江平，廖方摘要目的：认知功能障碍的发病率随年龄增长而升高，在当今老龄化日趋明显的社会，其已成为临床的常见症状。认知功能损伤严重者即为痴呆。据统计，目前全球痴呆患者约有2400万，其中逾半为阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，A9)，AD是老年期认知功能障碍最主要的病症。AD是一种以进行性认知障碍为主的中枢神经系统退行性疾病，其病理特征为老年斑(Senileplaque，se)形成、神经原纤维缠结(N

3、eurofibrillarytangle，NFT)和大量神经元丢失。理想的AD动物模型，对研究AD的发病机制及治疗具有重要意义。目前实验中常用的AD动物模型的建立途径有很多，但主要可归为以下三类：即以模拟AD症状学特征为主的动物模型，模拟AD组织病理特征为主的动物模型和多因素复合动物模型。AD动物模型的研究经过几十年的努力取得了很大的进展，每一种模型都在一定的程度或某些方面模拟了AD的症状和病理改变；但是至今尚无一种能够真实反映各个病例发展阶段特征并且广泛普及的动物模型。美国杜克大学医学院CokonCA．2006年首次提出APP单转基因小鼠再次敲除iNOS基因会导致病理样的Tau蛋白过度磷酸

4、化，并再次分配到皮层和海马神经元的胞体树突室，聚集累积。缺乏iNOS基因的瑞典APP突变小鼠增加了不溶性淀粉样肽的水平、神经元变性、caspase．3的活化和Tau蛋白裂解；这表明NO是淀粉样肽、半胱天冬酶激活和Tau聚集的连接点。CokonCA．首次提出这一理论的时候，遭到很多人的质疑。iNOS中文摘要基因定位于第17对常染色体上，只有在细胞受到刺激被激活后才表达，iNOS产生的NOfl邑持续相对较长时间(几小时到几天)。NO是重要的细胞内和细胞间的信号调节分子，在人体的生理和病理过程中具有双重性。NO既是一个有细胞毒性效应器作用的分子，是组织损伤的诱发因子和各种病变的增强因子，有其病理上

5、不好的一面；又是生物体许多部分的信号分子，是先天性免疫应答的调节性效应分子，作为一种信息传递物质维持正常的生理功能，有其生理性好的一面。在啮齿动物的研究中，提示iNOS活动在实验性自身免疫性或慢性炎症过程及其他一些疾病中可能起了有害作用。然而iNOS在很多疾病中的具体作用还不是很明确，尚需进一步深入研究。本课题目的在于研究NOS跟学习记忆的关联；研究在长期高脂饮食诱导下2qOS在学习记忆中的作用及相关机制。方法：3B龄的iNOS基因敲除小鼠(iNOSknockoutmice，iNOS一1和相同背景(背景鼠为C57BL／6dx鼠)的同窝出生的野生型小鼠(wildtype，WT)饲养一周以适应环

6、境，转基因小鼠PCR鉴定基因型后筛选使用。删基因敲除小鼠和野生型小鼠分别喂养正常饲料(Chow)和高脂饲料(Highfatcholesterol，HFC)。喂养20周后首先对各组小鼠进行焦虑行为的检测，包括旷场实验、高架十字迷宫实验和明暗箱实验。在焦虑行为学检测完之后，进行记忆行为的检测，包括Morris水迷宫实验和条件性恐惧实验。与此同时对各组小鼠进行了腹腔注射糖耐量实验(Intraperitonealglucosetolerancetest，IPGTT)，所有小鼠禁食16d,时后，称量体重，剪尾采血测定空腹血糖值。然后按2g／kg的剂量腹腔注射葡萄糖，分别在0、15、30、60、90、1

7、20min，用微血糖测量仪及配套的血糖试纸检测各时间段的血糖值，观察高脂饮食对糖耐量的影响。活体行为学和IPGTT测试结束后，各组部分小鼠，按50mg／kg的剂量腹腔注射伊文思蓝染料(Evanbluedye，EBD)，三小时后，用抗凝管取血，迅速断头，粘去脑膜，分离出左、右脑半球和小脑，以及心脏，肝脏，肾脏，脾，和小鼠大腿肌肉组织，甲酰胺提取染料；并取血获得血浆。检测各组织和血浆中EBD的浓度，评价血脑屏障通