骨髓增殖性肿瘤jak2 v617f、exonl2及mpl突变的研究

《骨髓增殖性肿瘤jak2 v617f、exonl2及mpl突变的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号学校代码密级学号2Q!QQ22Q2113骨髓增殖性肿瘤JAK2V617F、exonl2及MPL突变的研究ThestudyofJAK2V617F，exonl2andMPLmutationsinMyeloproliferativeNeoplasms研究生姓名指导教师姓名、职称学科专业研究方向湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一三年五月中文摘要自2005年JAK2基因14外显子上编码第617位氨基酸缬氨酸的点突变被发现，即为BCR／ABL融合基因阴性的MPN分子诊断提供了有力的依据。但单一的JAK2V617F突变似乎并不足以解释PV、ET、PMF的疾病发生及病程发展和转化的机制。在随后的

2、分子遗传学研究中，陆续发现在一些BCR／ABL阴性MPN患者遗传信息中存在着其它位点的基因突变，如JAK2基因第12号外显子(exonl2)、MPL基因第10号外显子(exonl0)、TET2基因等。近年来国际上相关研究显示MPN的病程发展及转化很可能不仅仅受JAK2V617F单一突变的影响。然而其它类型基因突变对该病种产生影响的机制却尚未明确。对此，我们分两个部份对JAK2V617F、JAK2exonl2及MPL的突变情况进行了初步的探讨和研究。第一部份：JAK2Y617F突变与MPN患者的临床关系目的：检测JAK2V617F突变在MPN患者中的发生率并分析其与PV、ET及PMF患者年龄

3、、外周血象的关系；从基因组DNA与RNA／cDNA水平检测MPN患者的JAK2V617F突变。方法：收集110例BCR／ABL阴性MPN患者骨髓样本及临床资料，另采集2例健康人骨髓样本设为健康对照组。将各例骨髓样本分为两等份，分别提取基因组DNA及总RNA，并将总RNA反转录为eDNA。使用基因组DNAJAK2V617F野生型引物对110例患者样本进行PCR扩增后回收电泳凝胶并送基因测序，对测序结果与患者临床资料进行统计学分析。对eDNA进行AS-PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳后随机挑选阳性样本进行测序验证。比较并分析在基因组DNA及I矾／cDNA水平对JAK2V617F突变检测结果的差异。

4、结果：在110例MPN患者检测样本中，基因组DNAJAK2V617F共检测出突变74例。而JAK2V617F突变发生率在PV、ET、PMF患者中分别为70．45％(31／44例)，70．9％(39／55,ff0)和36．4％(4／11例)，而在MPN患者总样本数中的发生率为67．3％(74／110例)。健康对照组样本骨髓细胞基因组DNA中未发现此阳性突变。经统计学分析，JAK2V617F突变阳性PV患者的年龄为61．8±12．4岁，外周血WBC为17．9±12．0(×109／L)，PLT为466．7±322．8(×109／L)，分别高于野生型患者的54．8±14．8岁，8．2±3．0(×1

5、09／L)和215．9±101．5(×109／L)；JAK2V617F突变阳性ET患者的年龄为61．2±12．5岁，WBC为15．2±5．8(×109／L)，Hb为125．8±35．2(g／L)，分别高于野生型患者的49．0±16．3岁，8．4-1-3．4(×109／L)和98．3+31．5(g／L)；JAK2V617F突变阳性PMF患者的Hb为99．3±22．5(g／L)，高于野生型患者的64．7±14．5(g／L)(以上各P

6、AK2V617F突变阳性的BCR／ABL阴性MPN患者与JAK2V617F突变阴性患者在发病年龄、外周血细胞计数上存在差异。cDNA检出JAK2V617F突变阳性率低于基因组DNAJAK2V617F检出率。第二部份：JAK2V617F、JAK2exonl2及MPL在MPN的突变情况。目的：使用BCR／ABL阴性MPN患者的骨髓细胞，从基因组DNA水平联合检测JAK2V617F、JAK2exonl2(K539L、N542一E543del、F537‘K539delinsL、H538QK539L)及MPL(W515L、W515K、W515R、W515A、$505N)共10个位点的突变情况。方法：

7、重新收集100例BCR／ABL阴性MPN患者的骨髓细胞，使用之前2例健康人骨髓细胞作为对照组，提取各样本基因组DNA并针对JAK2V617F、JAK2exonl2(K539L、N542一E543del、F537。K539delinsL、H538QK539L)、MPL(W515L、W515K、W515R、W515A、$505N)共10个突变位点设计基因组DNA野生及突变型引物，采用等位基因特异性PCR法进行扩增后经琼脂糖凝