池塘养殖鳗鲡人工繁育技术研究

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1、中山大学博士学位论文池塘养殖鳗鲡人工繁育技术研究姓名：谢骏申请学位级别：博士专业：水生生物学指导教师：林浩然20041008谢骏池塘养殖鳗鲡人工繁育技术研究2004年10月摘要我国多年来采用降海鳗鲡作为亲本进行人工繁殖研究，在理论和实践两方面都已取得较多成果，但以池塘养殖鳗鲡为亲本进行人工催熟、催产和早期培育的研究末见报道。本论文研究了以池塘养殖鳗鲡作为亲本，采用促性腺激素(GtH)放射免疫测定方法(GtHRIA)测定了诱导性腺成熟期削鳗鲡血清GtH的变化，测定了血清性类固醇激素(雌二醇E：和睾酮T)

2、的变化，研究了注射促性腺激素释放激素类似物(GnRt卜A)和地欧酮(DOM)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)和鲤脑垂体匀浆(CPE)、17Ⅱ，20B一双羟孕酮(DHP)对鳗鲡排卵的影响；开展了强化亲鱼培育、高温季节人工诱导鳗鲡成熟实验，对鳗鲡进行了人工繁殖实验，观察了胚胎发育和胚后发育过程；利用PCR方法，克隆了与鳗鲡繁育相关的一氧化氮合酶基因(NOS)，并进行了一氧化氮作用机理的初步研究。主要取得了以卜_的结果：1通过在饲料中添加鳕鱼肝油，强化培育池塘养殖鳗鲡，经过2个月的强化培育，其卯中脂肪酸的含量

3、发生变化：强化培育鳗鲡卵的高不饱和脂肪酸(PUFA)和n一3高不饱和脂肪酸显著高于降海鳗鲡和添加豆油的鳗鲡(P

4、幅度上升。降海鳗鲡和池塘养殖鳗鲡人工诱导期间的GtH变化一致，两者间没有显著差异(P>O．5)。在鳗鲡雌鱼中，血清Ez水平在性腺发育后期达到高峰并且随后在排卵后降低；在鳗鲡雄鱼中，血清T水平在性腺发育后期显著升高(P<0．01)。3当体重指数(BWI)达115±9．12％时，卵径达789．6±32．49m，此时为催产的适宜期，催产的效果明显。本试验通过采用记录BWI变化并与观察生殖孔开口、挖卵观察进行比较，证明测定体重指数法的效果好、实用性强，初步中山太学博士学位豫文建立了鳗绣久_I灌熬嚣量诧技术。4

5、采用hCG和鲤鱼脑难体混合(CPE)组合、LHRH—A+DOM组合以及DHP对成熟鳗鲡进行催产，均能健使鲠鳊排卵：DHP的催产效梁显著优于hCG+CPE、LItRH—A+DO～I两种鳃合(PO．05)。不同浓度DHP诱导塘养鳗排卵实验表明，DHP约用燮为1．O～2．0姆缝。5丌展商温季节(7月一8月)催熟鳗鲡试验，通过降低温度至18±l℃，雄性鳗鲠激素筵理50嚣焉(第5钟注菇)，有70％瓣令傣能够或熟。逶过降低湿度至1

6、8±l℃，雌性嫂鲡激素处理90天后，GSI达43％：此时的自然水温缳，瓣鲮鲡静GSI仪秀14％左右，注射乡}源激素也不能使鲠鳞性稼成熬。6鳗鲡的胚胎发育进程与温度关系密切。在水温为20．5℃时，胚胎发育需要时间为49h，所需积温1005鹰·时；在水温为22．5℃时，胚胎发育需要时间为39h，联霭积温878发·时；在水温为24．5℃时，胚胎发弯需要时闼为34h，所需积温833度·时。?在拳溱20±l℃，巍黄囊淤耀速度与日龄瓣关系曼撞数摆关，可建公式Y=0．087e加5782“(R值O．9824)表示，6

7、日龄仔鳗卵黄消耗殆尽，11日龄初孵仔鲮翱黄囊潞耗究，7鹜

8、羚应渡开鹭凝食。在7堪磊黪露，秘孵仔赣蠢日懿张合动作。在9-1lEj龄时，仔鱼出现s型攻击，在攻击食物前身体弯成“s”型，然后迅速挺直身体前冲孺食。12．15日龄仔鱼，板个剐兵“咬食攻击墅”。选用轮虫、小球藻、微囊饵料、蛋黄、鲍鱼鼹精卵等培育初孵仔鳗，在轮虫培育组中初孵仔鳗主动摄食。8通过PCR技术克隆鳗鳜一氧化氮合酶(NOS)基因。将日本鳗鲡暴瓣于浓度为3099／L的镉溶液中2周，测定一氧化氮(NO)和钙调鬣白(CAM)的交纯渗提。缝栗表鹗，

9、锈竞争蛙季露剁了钵内锈与CaM豹结合，簿低了～氧化氮合酶的活性，从而降低了NO的产生。进行了NO对鳗鲡精子的影响试验：在体矫孵育静穗子中魏入不霞韵釜静一鬣纯氮供镩稿营镌(SNP)，发瑷硝普钠对精子活力的影响具有剂量依赖效应，低剂量时(10。o～104tool·L。)可以明撼促进耩予的运动；中剂藿(10每～104tool·L。)时对精予运动影响不大；岗剂量时(大予10。5mol·L。1)糖子活力明显下降。在高浓度T004mol·L-1)，随时间延长，精予活