atp敏感性钾通道开放剂埃他卡林对h,2o,2诱导pc12细胞损伤的保护作用及其机制的研究

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1、南京医科大学硕士学位论文ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林对H<,2>O<,2>诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制的研究姓名：柴怡申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：胡刚;李皓20050501ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林对Ha02诱导PCI2细胞损伤的保护作用及其机制的研究研究生：柴怡导师：胡刚教授李皓副教授本文工作得到国家自然科学基金项目的资助南京医科大学2005年5月南京医科大学硕士学位论文英文缩写ABCCa2+DADilGluHPLCH202IPTIMSK册KCOsKir6．Xmito—K脚N^Ⅱ)APDPTPROSSURVDAC5．HD英文缩写与略语英文全名ATP—bi

2、ndingcassetteCalciumDopamineN．DiltiazemHClGlutamateHighperformanceliquidchromatographyHydrogenperoxideIptakalimIntermembranespaceATP-sensitivepotassiumchannelsKATPChannelopenersInwardrectifierK+channelsubunitsMitonchondrialKATPchannelN·-methyl·-D--aspartateParkinson’SdiseasePermeabilitytransitionpo

3、reReactiveoxygenspeciesSulphonylureareceptorVoltagedependentanionchannel5-Hydroxydecanoateacid中文全名ATP连接匣钙离子多巴胺盐酸地尔硫卓谷氨酸高效液相色谱过氧化氢埃他卡林内膜空间ATP敏感性钾通道ATP敏感性钾通道开放剂内向整流钾通道线粒体ATP敏感性钾通道N-甲基．D．天门冬氨酸帕金森病渗透性转换孔道活性氧磺酰脲类受体电压依赖性阴离子通道5，羟基癸酸南京医科大学硕士学位论文主塞揸璺ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林对H202诱导PCI2细胞损伤的保护作用及其机制的研究帕金森病(Parkinson’

4、Sdisease，PD)是好发于中老年人的慢性中枢神经系统退行性疾病，严重影响中老年人的生活质量和健康水平。PD的主要病理学改变是选择性黑质一纹状体通路的多巴胺(Dopamine，DA)能神经元退行性变、Lewy’S小体的出现以及纹状体DA含量的绝对减少。然而，对于导致DA神经元变性、坏死的确切机制目前还不清楚，临床也缺乏理想的治疗药物及手段。因此，探索PD的病因和研发富有潜力的治疗新药成为目前神经科学研究领域的热点之一。许多研究表明在PD病变过程中，黑质致密部DA能神经元线粒体呼吸链复合物I活性下降，ATP合成减少，造成细胞能量代谢障碍；而ATP敏感性钾通道(ATP．sensitivepo

5、tassiumchannels，KATP)是一类由胞内ATP／ADP水平调控、非电压依赖性的、直接耦联细胞代谢和电活动的特殊钾离子通道。包括本实验室在内的许多研究都已表明KATP在PD病变过程中发挥重要作用。埃他卡林(Iptakalim，巾T)是由我国学者自行设计和合成的一个脂肪仲胺类小分子化合物，药理学、电生理学、生化研究和受体结合实验已经确认IPT具有KATP开放剂的特征且具有能够透过血脑屏障的独特优势。本实验室的前期研究工作发现IPT能够拮抗6-OHDA、Mpp+、Rotenone等多种神经毒素导致的在体或离体细胞损伤。但是，口T是否通过作用于PCI2细胞上的KATP而实现保护作用?目

6、前尚缺乏直接的实验证据，IPT神经保护作用的确切机制也有待于深入研究。本文首先鉴定了PCI2细胞上K册亚基的组成，为IPT作用靶点南京医科大学硕士学位论文的确定奠定基础；进而利用过氧化氢(HydrogenperoXide，H202)的氧化作用建立PCI2细胞损伤模型，研究口T对Ha02诱导PCI2细胞氧化损伤的保护作用，并探讨其作用机制，为IPT发展成为新型的神经保护剂积累学术与实验依据。一、PCI2细胞表达KATP采用培养的PCI2细胞，应用RT-PCR、免疫荧光以及Westernblotting法分别确定PCI2细胞上KA忡亚基的mRNA及蛋白表达，发现PCI2细胞上表达Kir6．1和S

7、UR2亚基，而不表达Kir6．2、SURl亚基，这两种亚基可组成KATP，且Kit6．1亚基是线粒体Kmv的主要组成部分。二、埃他卡林对H202诱导PCI2细胞损伤的保护作用采用H202建立PCI2细胞氧化损伤模型，MTT法测定细胞存活率，发现H202可浓度依赖性地降低细胞存活率，并且使细胞的突起皱缩，胞体变圆发亮。预先给予1～100gMpT能够拮抗H202介导的细胞毒性，提高细胞存活率；10gM口T能够显著