il-32、mmp-9及tnf-α在哮喘小鼠气道内的表达及布地奈德的干预作用

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1、郑州大学硕士学位论文IL--32、MMP--9及TNF--α在哮喘小鼠气道内的表达及布地奈德的干预作用姓名：高伟霞申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：栾斌201205摘要IL．32、MMP．9及TNF．Q在哮喘小鼠气道内的表达及布地奈德的干预作用硕士研究生：高伟霞导师：栾斌专业：儿科学郑州大学第三临床学院河南郑州450052摘要2010年GINA方案中哮喘的定义是：哮喘是由多种细胞和细胞组分共同参与的气道慢性炎症性疾病。由于气道内反复炎症损伤和反复修复的刺激，从而导致气道重塑的发生，这一病理变化在哮喘

2、的早期、甚至在确诊哮喘前就已经出现了。因此我们推测气道重塑可能在哮喘的整个发病过程中都发挥了作用。白细胞介素一32(interleukin．32，IL一32)作为近年来新发现的一种细胞因子，很多文献证明其在炎症反应中有重要作用。2008年Calabresenl等研究发现IL～32在慢性阻塞性肺病(chronicobcsructivepulmonarydisease，COPD)患者中高表达，参与了COPD的特殊免疫反应，由于COPD的发病机制与支气管哮喘有许多相似之处，因此我们推测IL-32也可能参与了哮喘

3、的发病过程。肿瘤坏死因子a(tumornecrosisfactor-a，TNF．0【)和基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinases．9，MMP．9)在哮喘气道重塑过程中的作用已得到大量研究证实，但IL一32在此过程中的作用及其与两者之间的相关性均未见报道。本实验中通过建立小鼠哮喘模型，研究IL-32、IdMP-9和TNF—o(在哮喘小鼠气道内的表达，以及三者在气道重塑过程中的作用机制，同时雾化吸入布地奈德行干预治疗，旨在为寻求用于哮喘诊断及分类的新的标记物，以及新的治疗靶向提供实验

4、依据。目的通过检测哮喘小鼠气道内lL．32、MMP．9和TNF．c【的表达，目的是为了探摘要讨三者在哮喘气道重塑中的作用机制，以及布地奈德对它们在此过程中的干预作用，旨在为寻求用于哮喘诊断及分类的新的生物标记物，以及新的治疗靶向提供实验依据。材料与方法。1实验动物分组及哮喘模型制作方法SDF级5—6周龄雌性小鼠30只，随机分为3组，即哮喘组(A组)、干预组(B组)和对照组(C组)，每组10只。实验开始第1天、第8天和第15天，哮喘组每只小鼠腹腔注射卵清蛋白(ovalbumin，OvA)／氢氧化铝混悬液0．

5、2ml行基础致敏，从第22天开始隔天1次，共7次，，雾化吸入2％OVA气溶胶进行激发，每次激发30分钟：干预组致敏和激发的方法与哮喘组相同，不同的是每次激发30分钟前，先雾化吸入30分钟lmg(2m1)布地奈德混悬液干预治疗：对照组用生理盐水替代OVA，其方法和剂量均与哮喘组相同。2标本留取过程各组小鼠于术次雾化结束后24小时内，依次用乙醚麻醉，固定，开胸后从右心室插至肺动脉，生理盐水快速冲洗干净后，4％的甲醛溶液注入进行内固定，待小鼠全身僵硬固定后取左肺上叶，放入4％的甲醛溶液外固定24小时以上，然后酒

6、精梯度脱水、石蜡包埋、切片，厚度约5U／／／，最后做HE染色和免疫组织化学染色。3HE染色及免疫组织化学染色结果分析用ImageProPlus6．0图像分析软件对实验结果进行分析，从HE染色图片中挑选出完整的、级别相同的支气管作为测量对象，分别测量气道壁厚度(urn)和平滑肌层厚度(urn)，两者之差即为上皮粘膜层厚(urn)。挑选出免疫组化染色清晰的图片，每张切片选择5个高倍镜视野，分别测定IL．32、MMP．9和TNF．a阳性区的平均光密度值，该切片的代表值即为这5个值的平均值。4统计学分析采用SPS

7、S17．0软件对所得数据进行统计学分析。计量资料均用(X±s)表示。用单因素方差分析的方法对各组样本均数进行比较，用LSD-t检验方法进行各组问两两比较，用pearson相关性分析的方法进行各因素之间的相关性分析，以a=O．05为检验水准。结果1肺组织病理改变摘要1．1大体改变哮喘组小鼠肺组织均轻度均匀膨胀，表面有不规则的暗红充血区，颜色显苍白和浑浊，切面处可见白色分泌物渗出。布地奈德干预组也有上述改变，但程度轻微。对照组未见上述改变。1．2病理学改变哮喘组小鼠肺内支气管粘膜下、支气管及血管周围炎性细胞浸

8、润明显(包括嗜酸性粒细胞(Eosnophils，EOS)、中性粒细胞和淋巴细胞等)，粘膜下水肿，粘液腺增生，分泌物增多，粘膜皱襞增多，气道上皮可见多处断裂和上皮细胞的脱落，细支气管平滑肌轻度肥大，支气管壁和基底膜增厚且形状不规则。干预组小鼠肺组织也可出现以上病理变化，但程度较哮喘组明显减轻。对照组小鼠肺组织未发现以上病理改变。2免疫组化结果．2．1IL．32在哮喘组的表达(151．888士6．863)显著高于对照组(100．7