年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中骨连蛋白研究

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1、年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中骨连蛋白研究摘要：目的探讨LECs中SPARC于年龄相关性白内障晶状体中的临床表现，对比不同年龄白内障晶状体中SPARC的表达。方法将108例白内障患者按照年龄分组，利用常规蛋白印迹法检测各组白内障LECs中SPARC含量，并对比研究。结果白内障患者年龄大的一组，其LECs中的SPARC表达增加，并且SPARC的表达随着年龄的增长，表达愈来愈强烈。结论SPARC在人体白内障的发病过程中可能起到一定的作用，并且白内障患者的晶状体LECs中SPARC与患者的年龄相关。关键词：年龄相关性；对比研究；SPARCLECs晶状体上皮细胞(LECs'sh

2、ortofLensEpithelialCells)对白内障发病密切相关，在白内障的发病机理中具有重要意义，这与其结构与功能的变化决定晶状体(Crystallinelens)透明状况。骨连蛋白(SPARC)是由多细胞分泌形成的小分子蛋白[1],于人体中表达活跃，并有研究结果表明白内障发病与SPARC含量增加有关。本文分组对108例白内障患者的LECs中SPARC含量进行对比研究,并将其分成正常对照组、氧化损伤组和热应激处理组，分析SPARC在不同年龄白内障中的致病机理，以及探讨其在白内障的发病过程中起到的作用，并且分析其中的致病机理。1资料与方法1.1一般资料以本院108例

3、白内障超声乳化手术患者的晶状体前囊膜作为实验研究材料，108例患者中有男性56例,女性52例，年龄36〜82岁；所用实验试剂为羊抗人SPARC单克隆抗体（美国Santacluz公司）、DMEM培养基（美国Gibco公司）、胎牛血清（美国Gibco公司）；所用仪器为ThermoMLLtiskanMK3酶标仪、C02培养箱、低温高速离心机、JIM-X电泳仪、凝胶自动成像分析仪、GIS-700D型凝胶图像系统。永生化人LECs系SRA01/04由中国医学科学院肿瘤研究所提供。1.2方法1.2.1样本采集对照组材料来自12例正常人角膜晶状体前囊膜，在晶状体的赤道部，剪开前囊然后取

4、出囊膜。实验组为白内障手术患者108例，根据年龄段分成4组（78岁年龄段组各27例），超声乳化手术后取5mm直径晶状体前囊膜放入低温冰箱中保存。在实验前把每组的囊膜集合放一起，合并后每组一共5例，临床上分为皮质型。1.2.2细胞样本采用人LECsSRA01/04传代培养样本并将其分成正常对照组、氧化损伤组和热应激处理组。细胞中加入200*106mol/LH202作用6h；热应激处理组：42e30min,37e恢复2ho1.2.3检测SPARC含量利用常规蛋白印迹法检测各组白内障LECs中SPARC含量：把细胞样本囊膜剪碎并放入200卩L裂解液中进行超声粉碎，接着进行41、

5、12000i7min离心30minoBCA法定蛋白，对制成蛋白进行凝胶电泳［2］。电泳后将蛋白质转移到硝酸纤维素膜上，经过50min后，把膜放入3%BSA封闭12ho把BSA液体倒掉后加入1：500一抗进行孵育，lh之后用TBS洗膜，重复三次，然后加入BCIP/NBT显色剂显色。接着用GIS-700D型凝胶图像系统扫描分析，记录分析实验数据［3］。1.3统计学方法采用SPSS16.0统计学软件对本实验数据进行统计学分析。本次实验的数据都服从正态分布，并且方差齐性检测出方差齐。本次研究中，采用单因素方差分析进行不同年龄组的LECs中SPARC的平均灰度值的比较，采用SNK-

6、q检验来对各组间平均灰度值的两两比较，结果有统计学意义（P78岁年龄段组比其他三组的表达都更强烈（P