flg22及其衍生多肽诱导的海带(saccharina japonica)雌配子体防御反应研究

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1、万方数据谨以此论文献给我敬爱的导师及所有帮助过我的人-------------路博钧万方数据Flg22及其衍生多肽诱导的海带(Saccharinajaponica)雌配子体防御反应研究学位论文完成日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：万方数据独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对

2、本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所

3、将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日万方数据Flg22及其衍生多肽诱导的海带(Saccharinajaponica)雌配子体防御反应研究Flg22及其衍生多肽诱导的海带(Saccharinajaponica)雌配子体防御反应研究摘要我国是世界上海带产量和规模最大的国家，海带的年产量占世界海带产量的60%。在海带的人工育苗和养殖过程中，时常爆发病害，严重的时候，病害可导致海带减产25-30%

4、，造成巨大的经济损失。因此，研究海带育苗及人工养殖期病害发生的致病菌以及海带自身的抗病防御反应机制，对于海带病害的早期预防、诊断以及制定合理的生产管理措施以降低病害发生的概率是非常必要的、也是亟待解决的科学问题。现已证实flg22及其衍生多肽可诱导番茄（Lycopersiconesculentum）和拟南芥（Arabidopsisthaliana）产生防御反应，具有激发子活性。而我们前期研究的结果表明：flg22也是海带（Saccharinajaponica）的有效激发子。那么，flg22的衍生多肽是否也可诱导海带产生免疫防御反

5、应？针对这个问题，本文运用鲁米诺荧光检测法和荧光探针2’,7’-二氢二氯荧光黄双乙酸钠（2',7'-dichlorofluorescindiacetate，DCFH-DA）染色的方法，研究了人工合成的flg22及其衍生多肽诱导的海带雌配子体防御反应，以期建立稳定的激发子-海带实验模型，并为海带识别病原体或激发子的识别受体及其诱导的信号转导途径研究奠定前期工作基础。研究结果不仅可丰富海带分子病理学理论，也可为抗病海带新品系的繁育提供理论依据。研究结果如下：1、Flg22及其衍生多肽诱导的海带雌配子体H2O2的定量检测运用鲁米诺荧光

6、检测法，研究了不同浓度flg22及其衍生多肽—flg15、flg14及flg22D43A诱导的海带雌配子体H2O2的产生。在0-200μM的浓度范围内，flg22和flg15诱导海带雌配子体产生的H2O2随着多肽浓度的增加而增加，当浓度增加到260μM时，雌配子体释放的H2O2没有明显上升。此外，诱导海带雌配子体产生相同的H2O2释放量，所需flg22的浓度略低于flg15浓度，说明flg22作为激发子，其活性强于flg15。对于flg14，400-1000μM范围内，海带雌配子体产生H2O2的量随着浓度的增大而增大。Flg22

7、D43A是将鞭毛蛋白N端第43位的天冬氨酸突变为丙氨酸的突变多肽。I万方数据Flg22及其衍生多肽诱导的海带(Saccharinajaponica)雌配子体防御反应研究在高等植物中，第43位的天冬氨酸是flg22具激发子活性的活性位点。研究结果表明，1000μM的flg22D43A仍不能诱导海带雌配子体产生H2O2，说明鞭毛蛋白N端第43位的天冬氨酸也是flg22作为海带激发子的活性位点。相同浓度下flg22、flg15、flg14及flg22D43A不同诱导时间的实验结果表明：当浓度为90μM时，在0-2h内flg22和flg

8、15诱导海带雌配子体释放的H2O2随着时间的延长而增加，并在2h达到峰值，分别为2400RLU和1865RLU（relativelightunit）。随后H2O2释放量随着诱导时间的延长而减小，6h后H2O2释放量恢复到初始水平。其中在相同诱导时间下，flg22